10×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液注意事項(xiàng):
1) 由于細(xì)胞凋亡是一個(gè)快速的過程,建議樣品在染色后1小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行分析。
2) 對(duì)于貼壁細(xì)胞,消化是一個(gè)關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡時(shí)如有漂浮細(xì)胞,需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色。處理貼壁細(xì)胞時(shí)要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。*消化時(shí)間過短,細(xì)胞需要用力吹打才能脫落,容易造成細(xì)胞膜的損傷,PI攝入過多;消化時(shí)間過長(zhǎng),細(xì)胞膜同樣易造成損傷,甚至?xí)?br />
影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合。消化時(shí)將*鋪滿孔板底后,輕搖時(shí)*與細(xì)胞充分接觸,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段時(shí)間,待細(xì)胞間空隙增大,瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA,EDTA會(huì)影響Annexin V與PS的結(jié)合。
3) 實(shí)驗(yàn)中如需要固定細(xì)胞,比如在檢測(cè)凋亡的同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞周期,只能選用Annexin V-FITC,而不能選用Annexin V-EGFP,因?yàn)樵诠潭ㄟ^程中EGFP會(huì)變性導(dǎo)致喪失激發(fā)熒光的能力。固定需要先將細(xì)胞與Annexin V-FITC進(jìn)行孵育,并用binding buffer洗掉未結(jié)合的Annexin V-FITC。因?yàn)楣潭ㄟ^程中細(xì)胞通透性增加會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞碎片,可以和Annexin V結(jié)合,對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾。
4) 如果樣品來源于血液,請(qǐng)務(wù)必除去血液中的血小板。因?yàn)檠“搴蠵S,能與Annexin V結(jié)合,從而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。可以使用含有EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。
5) 試劑在開蓋請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。
紅細(xì)胞陰離子交換蛋白1抗體
腦特定蛋白Brn3B抗體
Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
骨形態(tài)發(fā)生蛋白4抗體
腦和急性白血病胞漿蛋白抗體
骨髓基質(zhì)干細(xì)胞抗原2抗體
組蛋白相關(guān)Bmi1抗體
乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體
大腦富含鳥苷酸激酶相關(guān)蛋白抗體
腦富含膜附著信號(hào)蛋白1抗體
卵黃狀黃斑病蛋白3抗體
卵黃狀黃斑病蛋白抗體
卵黃狀黃斑病蛋白4抗體
炭疽桿菌菌體蛋白抗體
EBV立即早期基因BRLF1抗體
腦表達(dá)X連鎖蛋白4抗體
B淋巴細(xì)胞新型蛋白1抗體
核突觸蛋白β抗體
BTRC2蛋白抗體
BEND3蛋白抗體
BEND4蛋白抗體
BEND6蛋白抗體
胎兒阿茲海默病抗原/核小體重塑因子抗體
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白2抗體
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白5抗體
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白4抗體