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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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犬病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:BKP6513
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-06-18
  • 更新日期: 2024-11-26
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BKP6513
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50T
純度 詳見說明書%
CAS編號
是否進(jìn)口

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

犬病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

Canine Herpes Virus

BKP6513

概述:
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會相應(yīng)的增加,這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNARNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認(rèn),廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

使用方法:
一、犬病毒探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2.
標(biāo)記6個離心管,分別為76,54,32。
3.
用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6.
換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8.
如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL。
9.
用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
10.
如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加23倍。
11.
產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

熒光定量PCR服務(wù):
簡介:實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1
、熒光定量PCR服務(wù)要求:
01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2
、熒光定量PCR操作程序
01)引物(探針)設(shè)計與合成。
02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA
03)進(jìn)行Real Time PCR實驗,進(jìn)行實驗結(jié)果分析。
04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3
、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn):
 
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA
模板
2
.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTPdTTP2mM
5
Taq
二、操作步驟
1
.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72 保溫7min
3
.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
心脂肪酸結(jié)合蛋白 (H-FABP)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進(jìn)口分裝  Norfloxacin  中文名:諾氟沙星  分子式:C16H18FN3O3  度:98.0%

心脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱:   hea fatty acid-binding protein   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   H-FABP  Norethindrone  中文名:炔諾酮  分子式:C20H26O2  度:98.0%

心活性多肽13   英文名稱:   Apelin 13   英文縮寫:   AP13   規(guī)格:   48T/96T  Norandrostenedione  中文名:19-去甲-4-雄烯二酮  分子式:C18H24O2  度:98.0%

心活性多肽   英文名稱:   Apelin   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   AP  n-Octylbenzene  中文名:  分子式:C14H22  度:98.0%

心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4   英文名稱:   cardiac muscle anscription factor GATA4   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   GATA4  Androstenediol  中文名:雄烯二醇  分子式:C19H30O2  度:98.0%
5-Aminoindazole 
中文名:5-氨基吲唑  分子式:C7H7N3    胰蛋白酶抑制劑   10g

5-Aminofluorescein  中文名:5-氨基熒光素  分子式:C20H13NO5    ypsinInhibitor,Soybean   1g              

5-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  中文名:5-氨基-2-萘磺酸  分子式:C10H9NO3S    NO)測定試劑盒(還原酶法)

5-Amino-2-methylindole  中文名:5-氨基-2-甲基吲哚  分子式:C9H10N2    超氧化物歧化酶(SOD)分型測試盒(羥胺法)

5-Amino-1-naphthol  中文名:5-氨基-1-萘酚  分子式:C10H9NO    微量二(MDA)測定試劑盒(TBA法)
兔抗腦組織抗體elisa試劑盒   兔抗腦組織抗體試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   兔抗腦組織抗體試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔抗腦組織抗體試劑盒、兔抗腦組織抗體elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。     5-(4-(2-(5-Ethylpyridin-2-yl)ethoxy)benzylidene)thiazolidine-2,4-dione  中文名:  分子式:C19H18N2O3S 

兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde  231278-84-5  中文名:  分子式:C26H17ClFN3O3  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

兔抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5-(4-(2-(5-Ethylpyridin-2-yl)ethoxy)benzylidene)thiazolidine-2,4-dione  144809-28-9  中文名:  分子式:C19H18N2O3S 

兔抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  5-Androsten-3β-ol-17-one ethyleneketal  中文名:  分子式:C21H32O3  度:98.0%

兔巨噬細(xì)胞蛋白-5(rabbit MIP-5)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進(jìn)口分裝     5-Hydroxymethylfurfural  中文名:5-羥甲基糠醛  分子式:C6H6O3
犬病毒探針法熒光定量PCR試劑盒Annonacin  中文名:  分子式:C35H64O7  度:97.0%  兔子肝細(xì)胞生長因子elisa試劑盒   兔子肝細(xì)胞生長因子試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   兔子肝細(xì)胞生長因子試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子肝細(xì)胞生長因子試劑盒、兔子肝細(xì)胞生長因子試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。

Buergerinin G  中文名:  分子式:C9H12O4  度:兔血纖蛋白原elisa試劑盒   兔血纖蛋白原試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   兔血纖蛋白原試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔血纖蛋白原試劑盒、兔血纖蛋白原elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。

(R,E)-Deca-2-ene-4,6-diyne-1,8-diol  中文名:  分子式:C10H12O2  度:兔素B2elisa試劑盒   兔素B2試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   兔素B2試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔素B2試劑盒、兔素B2 elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。

9,17-Octadecadiene-12,14-diyne-1,11,16-triol  中文名:  分子式:C18H26O3  度:兔血清淀粉樣蛋白Aelisa試劑盒   兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔血清淀粉樣蛋白A試劑盒、兔血清淀粉樣蛋白A elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月。  

1-Acetoxy-9,17-octadecadiene-12,14-diyne-11,16-diol  中文名:  分子式:C20H28O4  度:兔子肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝


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