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實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

瑞-吉染色劑   100ml  3-Amino-3-phenyl-1-propanol  14593-04-5  中文名：3-氨基-3-苯基-1-丙醇  分子式：C9H13NO  度：98.0%   

軟水硬度測定試劑盒   Water hardness determination kit  Physapruin A  155178-03-3  中文名：  分子式：C28H38O7  度：96.5%  關(guān)鍵詞：  毒性; 酸漿屬; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

軟骨糖蛋白 39(YKL-40)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Ondansetron  99614-02-5  中文名：昂丹司瓊  分子式：C18H19N3O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

乳鐵蛋白（ Lactoferrin ）   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  3-Amino-2-naphthoic acid  5959-52-4  中文名：3-氨基-2-萘甲酸  分子式：C11H9NO2  度：98.0%   

乳糖   100g  3-Amino-2,6-piperidinedione   24666-56-6  中文名：  分子式：C5H9ClN2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
WL1(大鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100ml鹽酸羅格列酮Rosiglitazone HCL 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

乙型病毒VictoriaPCR檢測試劑盒（熒光PCR法）肺動脈平滑肌細(xì)胞總RNAHPASMC NA阿托伐他汀叔丁基酯Atorvastatin tert-Butyl Ester 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

PLA2G2E Others Mouse 小鼠 PLA2G2E 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 阿托伐他汀甲酯Atorvastatin Methyl Ester質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

U973 細(xì)胞氮卓斯汀-13C,d3Azelastine-13C,d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CL-0344HAN(羊膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2N-去甲氮卓斯汀N-Desmethyl Azelastine質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
ACVR1B Others Human  ALK4 / ACVR1B 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸布比卡因（標(biāo)準(zhǔn)品）Bupivacaine  Monohydrate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

*星狀細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)雙環(huán)醇（標(biāo)準(zhǔn)品）Bicyclol質(zhì)量規(guī)格：含量測定

IRAK4 Others Human  IRAK4 / IRAK-4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸貝尼地平（標(biāo)準(zhǔn)品）Benidipine 質(zhì)量規(guī)格：含量測定

大鼠*外分泌腺細(xì)胞;AR42J甲異靛（標(biāo)準(zhǔn)品）Meisoindigo質(zhì)量規(guī)格：供UV法含量測定用

MCF7細(xì)胞，癌細(xì)胞 細(xì)胞,QGY-7701細(xì)胞 T-108B膠原酶(含100mL酶解緩沖液)10mL鹽酸丁螺環(huán)酮（標(biāo)準(zhǔn)品）Buspirone 質(zhì)量規(guī)格：含量測定
22-Dehydroclerosteryl acetate  中文名：  分子式：C31H48O2  度：93.0%  兔環(huán)氧化酶-1(rabbit COX-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

Pregnenolone  中文名：孕烯醇酮  分子式：C21H32O2  度：98.5%  兔核因子κ B   英文名稱：   Rabbit Nuclear factor κB   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NFkB

Chlorotetracycline  57-62-5  中文名：金霉素  分子式：C22H23ClN2O8    兔骨保護(hù)素<破骨細(xì)胞抑制因子>   英文名稱：   Rabbit Osteoprotegerin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   OPG

Levodopa  59-92-7  中文名：左旋多巴  分子式：C9H11NO4    兔血小板活化因子   英文名稱：   Rabbit Platelet Activating Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PAF

Nevirapine  129618-40-2  中文名：奈偉拉平  分子式：C15H14N4O    兔蛋白激酶A   英文名稱：   Rabbit Protein Kinase A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PKA