產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BK-P64622 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64622 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
正常大鼠腎細(xì)胞(EGF受體陽性);NRK49F伊洛馬司他(GM6001)Ilomastat,GM6001,Galardin質(zhì)量規(guī)格:>98%,MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑
CSF1R Others Human CSF1R / MCSF Receptor / CD115 (aa 543-922) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 愈創(chuàng)木酚縮水甘油 Guaiacol glycidyl ether質(zhì)量規(guī)格:>98%
T-105AIII型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)1mL4-氨基安替比林4-Aminoantipyrine質(zhì)量規(guī)格:AR,分析
SK-MEL-1, 皮膚色素瘤細(xì)胞 細(xì)胞,CEM細(xì)胞 SW579(細(xì)胞)N-溴代丁二(NBS)N-bromosuccinimide質(zhì)量規(guī)格:AR
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;MEF溶葡球菌酶,溶葡萄球菌酶 Lysostaphin質(zhì)量規(guī)格:BR,5000U/Pack
Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)左西孟坦Levosimendan質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
GPR114 Others Human GPR114 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 利奈唑酮-d3Linezolid-d3質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
大鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL13X分子篩(60-80目,氣相、液相色譜柱)Molecular sieves Type 13X質(zhì)量規(guī)格:60-80目,氣相、液相色譜柱
AZ-521細(xì)胞 Human gasic cancer cells AZ-521 MEM+10% FBS13X分子篩(80-100目,氣相、液相色譜柱)Molecular sieves Type 13X質(zhì)量規(guī)格:80-100目,氣相、液相色譜柱
IFNA13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNA13 / Ierferon alpha-13 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)13X分子篩(40-60目,氣相、液相色譜柱)Molecular sieves Type 13X質(zhì)量規(guī)格:40-60目,氣相、液相色譜柱
整合SV40基因的上皮細(xì)胞;HBL-100 [HBL100]鈮標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Niobium standard質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml
DNASE1 Others Human DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL,基體:1%HNO3)Nickel Standard質(zhì)量規(guī)格:100μg/mL,基體:1%HNO3
CL-0384MDA-MB-468-06(癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:水)Potassium standard質(zhì)量規(guī)格:500mg/L,溶劑:水
Mv1Lu細(xì)胞,貂肺上皮細(xì)胞 紅白細(xì)胞細(xì)胞,HEL細(xì)胞 皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/mL,基體:1%HCl) Potassium Solution質(zhì)量規(guī)格:1000μg/mL,基體:1%HCl
鯉魚尾鰭細(xì)胞;YZ16鐠標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Praseodymium standard質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml
海馬趾神經(jīng)細(xì)胞cDNAHN-h cDNA吡羅昔康-d3Piroxicam-d3質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
PRKAR1A Others Human PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 泊沙康唑-d4Posaconazole-d4質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
T739小鼠肺腺株;LA795利福昔明標(biāo)記d6Riimin - Labeled d6質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
HCCC-9810細(xì)胞,亞力山大細(xì)胞 APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,7WCY1.0細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E2羅匹尼羅N-氧化物Ropinirole N-Oxide質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
Lec1(倉鼠卵巢細(xì)胞) 5×106cells/瓶×23-氧羅匹尼羅鹽酸鹽3-Oxo Ropinirole 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative
real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR