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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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禽正呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
  • 貨號(hào):BK-P64636
  • 價(jià)格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-07-07
  • 更新日期: 2024-11-26
產(chǎn)品詳請(qǐng)
產(chǎn)地 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
品牌 帛科
貨號(hào) BK-P64636
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 %
CAS編號(hào)
是否進(jìn)口


絲狀鏈霉菌   枝芽胞桿菌 Virgibacillus sp.
脫硫弧菌脫硫亞種(脫硫微螺菌、脫硫螺菌、脫硫桿菌、脫硫芽孢弧菌、脫硫弧菌)   枝芽胞菌 Virgibacillus sp.
擬熱帶假絲酵母   鹽水球菌 Salinococcus sp.
許旺酵母變種   蘇云金芽胞桿菌勵(lì)木亞種 Bacillus thuringiensis subsp. tochigiensis
胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)90mm   盲腸腸球菌
海棗曲霉   巴西毛殼
噬糖鹽紅菌 
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

禽正呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

50

BK-P64636

實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix
2mM
4 μl
引物110pM
2 μl
引物210pM
2 μl     Taq
酶 (2U/μl
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl
1 μl
ddH2O 50 μl

PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,1530℃孵育23分鐘。4℃12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA
沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530℃孵育10分鐘后,于4℃12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA
清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA
干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1
、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2
、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3
、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4
、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2.
標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 76,5,4,32。
3.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6.
換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CHO鹽酸雷尼替丁Ranitidine HCl質(zhì)量規(guī)格:>98%

Tul-1細(xì)胞,細(xì)胞系 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞,WB-F344細(xì)胞 T-101B胰蛋白酶(100mL 酶解緩沖液)10mL鹽酸雷尼替丁(標(biāo)準(zhǔn)品)Ranitidine HCl質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

SK-MES-1(肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2熒光素鈉Fluorescein di salt質(zhì)量規(guī)格:BS

HUVEC-c pre-screened 預(yù)選型正常臍內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 500,000cells 大隱平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)D-蟲熒光素鈉鹽;D-熒光素鈉鹽D-Luciferin  salt質(zhì)量規(guī)格:>98%

原代骨骼肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml2ˊ,7ˊ-二氯熒光素鈉鹽2',7'-Dichlorofluorescein  Salt 質(zhì)量規(guī)格:>98%
骨骼肌細(xì)胞生長(zhǎng)添加物SkMCGS奧美拉唑-d3Omeprazole-d3質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口

VEGFA Others Human  VEGF121b / VEGF-A 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 奧美拉唑酸二鈉鹽Omeprazole Acid Di Salt質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口

癌細(xì)胞;MDA-MB-435S2-代腺苷2-Iodo Adenosine質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口

CNE-2Z細(xì)胞,母系細(xì)胞 小鼠*瘤細(xì)胞,SP2/0細(xì)胞 恒河猴腎細(xì)胞;RM-1N6-丙酰蟲草素N6-Propionyl Cordycepin 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口

MSTO-211H(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2N6-月桂酰蟲草素N6-Lauroyl Cordycepin 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
上皮細(xì)胞培養(yǎng)基-2EpiCM-2-prf強(qiáng)力霉素鹽酸鹽Doxycycline 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口

CDH2 Others Human  N-Cadherin / CD325 / CDH2 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 強(qiáng)力霉素磺基水楊酸Doxycycline ssa質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口

原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞;293 Ad5強(qiáng)力霉素海克酸鹽Doxycycline Hyclate質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口

HNE3細(xì)胞,細(xì)胞 小鼠瘤細(xì)胞,EL4細(xì)胞 CM-H022成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL帕米1酸二鈉鹽Pamidronate, Di Salt質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口

NCI-N87(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2頭孢呋辛Cefuroxime質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
ES-2 卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞秦皮甲素(標(biāo)準(zhǔn)品)Esculin質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CW-2腺癌細(xì)胞 CW-2 human colon adenocarcinoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS氨基三乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Nitrilotriacetic acid質(zhì)量規(guī)格:供HPLC法雜質(zhì)檢查用

TNFSF13 Protein Mouse 重組小鼠 TNFSF13 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)1,3-(標(biāo)準(zhǔn)品)1,3- Propylene Glycol質(zhì)量規(guī)格:供檢查用

脂肪細(xì)胞-皮下(HPA-s)(1×106 ) Raji,Butt's瘤細(xì)胞 Human二甘醇(標(biāo)準(zhǔn)品)Diethylene Glycol質(zhì)量規(guī)格:供檢查用

;Calu-3氯噻嗪(標(biāo)準(zhǔn)品)Chlorothiazide質(zhì)量規(guī)格:供HPLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1
RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2
)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3
)客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
4
)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCRquantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNARNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對(duì)定量)和定性分析。
禽正呼腸孤病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒主要服務(wù):DNARNA*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR


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