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產(chǎn)品簡稱：NCI-H460 [H460]細(xì)胞
中文名稱：人大細(xì)胞細(xì)胞

規(guī)格：1×106

種屬：人

來源：大細(xì)胞；轉(zhuǎn)移；男性

培養(yǎng)基：1640

狀態(tài)：貼壁

單位:T25/瓶

貨號：E0174

帛科細(xì)胞培養(yǎng)器材的選擇：從培養(yǎng)量大小來講，從小到大有細(xì)胞培養(yǎng)板、細(xì)胞反應(yīng)管、搖瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、細(xì)胞工廠等，更大就是反應(yīng)器了。

帛科細(xì)胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積從25-225平方厘米不等，一般都經(jīng)過表面改性處理，適合細(xì)胞貼壁和生長。225ml 、175ml的多用于大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)用（如單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)等），75ml的多用于一般性細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用（一般性的傳代，保存細(xì)胞，為實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞等），25ml一般是用來復(fù)蘇細(xì)胞或細(xì)胞較少時(shí)的培養(yǎng)，還有做原代細(xì)胞時(shí)也可以做多瓶而避免交叉污染。產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟和注意事項(xiàng)：
1.細(xì)胞復(fù)蘇
將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。將融化的細(xì)胞移入離心管中，加入37oC預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。
加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細(xì)胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.細(xì)胞傳代
帛科細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%（過量不足，過晚細(xì)胞狀態(tài)不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養(yǎng)，一般1:3至1:5細(xì)胞一代，即從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時(shí)間，非細(xì)胞有絲分裂次數(shù)）時(shí)，去掉完全培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶（注意：消化液的量以蓋住細(xì)胞*，*消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度）進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。 
加入適量DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗，棄上清液。
加入DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后按照所需細(xì)胞量在含5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3.細(xì)胞凍存
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，去掉完全培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進(jìn)行消化，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中約2-3min。加入DMEM完全培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM完全培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入lml凍存液（90%胎牛血清，10% DMSO。 
一般來講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整，凍存液中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營養(yǎng)，另一方面可以在細(xì)胞凍存過程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì)，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護(hù)細(xì)胞），放入凍存管內(nèi)（管內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入4oC冰箱中凍存30min，然后放入-20oC冰箱中凍存30min，再置于-80℃冰箱內(nèi)過夜。
*天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個(gè)月。 
細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷，引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進(jìn)而促使細(xì)胞死亡。
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小鼠胃標(biāo)志物CA199ELISAKit     Bortezomib  中文名：硼替佐米  分子式：C19H25BN4O4  度：98.0%

小鼠維生素K1(VK1)ELISA試劑盒              Macranthoin G  159934-13-1  中文名：灰氈毛忍冬素G  分子式：C26H26O12 

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鹽酸阿米替林  HPLC≥98% 100mg 10倍PIPES濃縮緩沖溶液100毫升

去甲替林鹽酸鹽 HPLC≥98% 20mg MouseChorionicGonadoophin,CGELISA試劑盒小鼠絨毛膜激素(CG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

苯佐卡因  HPLC≥99% 100mg 小鼠性因子(vWF)ELISA試劑盒 ，英文名： vWF ELISA Kit

飛燕草色素 HPLC≥98% 10mg 兔子內(nèi)皮抑素(ES)ELISA檢測試劑盒rabbitEndostatin,ESELISAKit 96T/48T

矮牽牛色素   HPLC≥98% 5mg 犬α-3干擾素(IFN-α3)試劑盒 Canine Ierferon alpha-3,IFN-α3 ELISA kit

芍藥素  HPLC≥98% 10mg 英文名稱HumanEpinephrineELISAKit人(Epinephrine)規(guī)格：96T/48T

錦葵色素  HPLC≥98% 10mg 單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測試劑盒20

環(huán)腺苷 HPLC≥98% 20mg RatMacrophageColony-StimulatingFactor,M-CSFELISA試劑盒大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

安息香 HPLC≥99% 100mg 小鼠細(xì)胞粘附分子1(VCAM1)ELISA試劑盒 ，英文名： VCAM1 ELISA Kit

D綿子糖 HPLC≥98% 20mg 兔子腦素/腦尿肽(BNP)ELISA檢測試劑盒rabbitbrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit 96T/48T
TGFBR3 Others Mouse 小鼠 TGFBR3 / Betaglycan 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1,3-雙(六氟-α-羥基異丙基)苯(>98.0%(GC))1,3-Bis(hexafluoro-α-hydroxyisopropyl)benzene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

NCI-H446 人小細(xì)胞細(xì)胞β-NADH;還原性輔酶I二鈉鹽β-NADH.hydrate質(zhì)量規(guī)格：>90%,羅氏分包

hDPSCs, 人前牙髓干細(xì)胞蘇拉明鈉Suramin 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞彈性蛋白酶Elastase, pancreatic from porcine pancreas質(zhì)量規(guī)格：30 units/mg

人正常上皮細(xì)胞;MCF 10A 人胰腺星狀細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL脂肪酶Lipase質(zhì)量規(guī)格：20000U/g,BR
NCI-H460 [H460]細(xì)胞人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤;U-87 MG [U87MG;U87 MG] 大鼠軟骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLGalNAc1-β-PNP4-硝基本-N-乙酰-β-D-基半乳糖苷250克BR，98%

EL4 小鼠瘤細(xì)胞二縮水甘油迷;二環(huán)氧甘油迷 1,4-Butcnqdiol diglycidyl qtqr; 42-79-8

PRSS3 Others Human 人 ypsin-3 / PRSS3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 溴東莨菪減 MqthscopolcMinq BroMidq 122-41-9

Asp2人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞;FC33etxylenediaminedixy7nochloride鹽酸乙二安500克BR

SRC Others Human 人 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) B12培養(yǎng)基瓊脂USP(+4℃)NA
注意事項(xiàng)：
NCI-H460 [H460]細(xì)胞（1）預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱；
（2）用75%酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手；
（3）正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且減少污染；
（4）點(diǎn)燃酒精燈：注意火焰不能太??；
（5）嚴(yán)格的無菌操作；
（6）貼壁細(xì)胞消化適度：消化的時(shí)間受消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化；
（7）傳代細(xì)胞所有的操作盡量靠近酒精燈火焰。每次*只進(jìn)行一種細(xì)胞的操作，每種細(xì)胞使用一套器材。避免交叉感染；
（8）傳代細(xì)胞瓶口每次打開或者關(guān)閉都需要在酒精燈上消毒。