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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

基因蛋白P53   英文名稱：   aioncogene p53 protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   P53  Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside  1808159-02-5  中文名：  分子式：C56H84O20  度：92.0%  關(guān)鍵詞：  孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

蛋白DKK3   英文名稱：   Dikkopf 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DKK3  Qingyangshengenin  中文名：青陽(yáng)參苷元  分子式：C28H36O8  度：97.5%

異育銀鯽趨化因子CCL5   英文名稱：   Freshwater fish Chemokine C-C motif ligand 5   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CCL-5  Pyrimethamine  中文名：乙胺嘧啶  分子式：C12H13ClN4  度：99.0%

異育銀鯽球蛋白M   英文名稱：   Freshwater fish Immunoglobulin M   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IgM  Pyrimethamine  58-14-0  中文名：乙胺嘧啶  分子式：C12H13ClN4  度：99.0%   

異育銀鯽球蛋白D   英文名稱：   Freshwater fish Immunoglobulin D   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IgD  Pyrimethamine  中文名：乙胺嘧啶  分子式：C12H13ClN4
GRC-1細(xì)胞，細(xì)胞 鼠纖維細(xì)胞系,WEHI 164細(xì)胞 CL-0446SUP-B15(Ph+急淋細(xì)胞系)5×106cells/瓶×2鉬標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL,基體: 1%HCl)質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL,基體: 1%HClMolybdenum standard

EJ(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2水質(zhì)鎳標(biāo)樣(濃度范圍:0.959-1.01(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：濃度范圍:0.959-1.01(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品Nickel standard

hCD34+-CB-c single donor 從臍帶血提取的類CD34+祖細(xì)胞(hCD34+-CB)，單一來源 100000 卵巢成纖維細(xì)胞HOF內(nèi)消旋-2,3-二丁二酸(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)meso-2,3-Dimercaptosuccinic Acid

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元吡哆醛-L-谷氨酸二鉀鹽[藥物研究配體]質(zhì)量規(guī)格：藥物研究配體Pyridoxylidene-L-glutamic Acid Dipotassium Salt

LTBR Others Rat 大鼠 LTBR / TNFRSF3 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 吡哆醛-L-異亮氨酸鉀鹽[藥物研究配體]質(zhì)量規(guī)格：藥物研究配體Pyridoxylidene-L-isoleucine Potassium Salt
細(xì)胞;A-427 [A427] 大鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL虎杖甙/虎杖苷/白藜蘆醇苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Polydatin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

EL4.IL-2 小鼠瘤細(xì)胞十八烷醇,1-十八醇(標(biāo)準(zhǔn)品)1-Octadecanol質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

MET Others Mouse 小鼠 c-MET / HGFR 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 十八烷醇,1-十八醇1-Octadecanol質(zhì)量規(guī)格：>98%

皮膚成纖維細(xì)胞;HSAS4Ruxolitinib (INCB018424)Ruxolitinib (INCB018424)質(zhì)量規(guī)格：>99%

STAT4 Others Human  STAT4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) MK-1775,MK1775 MK-1775質(zhì)量規(guī)格：>98%,Wee1激酶抑制劑
Betamipron  中文名：倍他米隆  分子式：C10H11NO3    轉(zhuǎn)基因植物Bar基因*試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Betamethasone  中文名：倍他米松  分子式：C22H29FO5    轉(zhuǎn)基因植物Bar基因*試劑盒   48T

Benzyl nicotinate  中文名：煙酸芐酯  分子式：C13H11NO2    轉(zhuǎn)基因植物TE基因*試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T              

Benzyl L-(+)-mandelate  中文名：L-(+)-扁桃酸芐酯  分子式：C15H14O3    轉(zhuǎn)基因植物PRSV基因*試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Benzyl cinnamate  中文名：肉桂酸苯甲酯  分子式：C16H14O2    轉(zhuǎn)基因植物PRSV基因*試劑盒   48T

雞源性成分PCR檢測(cè)試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。