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使用方法：
收到細(xì)胞人角膜內(nèi)皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)
簡(jiǎn)稱：HCEC-B4G12

種屬：人

來(lái)源：角膜；內(nèi)皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；女性

培養(yǎng)基：DMEM

狀態(tài)：貼壁

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號(hào)：AE0349

基本特性：
（ 1 ）組織來(lái)源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

8-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  中文名：8-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S    Acetosyringone   1g

8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione  中文名：  分子式：C28H40O3    香草   25g

7α-Methoxy-5α,6α-epoxyergosta-8(14),22-dien-3β-ol  中文名：  分子式：C29H46O3    Acetovanillone   50g              

7α-Hydroxystigmasterol  中文名：7α-羥基豆甾醇  分子式：C29H48O2    乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（ChAT）測(cè)定試劑盒（測(cè)血清）（紫外比色法）

7α-Hydroxysitosterol  中文名：7α-羥基谷甾醇  分子式：C29H50O2    乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（ChAT）測(cè)定試劑盒（測(cè)組織）（紫外比色法）
血清淀粉樣蛋白   英文名稱：   serum amyloid A protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   SAA  Parecoxib   中文名：帕瑞考昔鈉  分子式：C19H17N2NaO4S  度：98.0%

血清（LDL）測(cè)試盒   Two semi test case  p-Anisoin  中文名：對(duì)茴香偶姻  分子式：C16H16O4  度：98.0%

血濃度測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  p-Anisil  中文名：茴香偶酰  分子式：C16H14O4  度：98.0%

血濃度測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣  p-Anisil  1226-42-2  中文名：茴香偶酰  分子式：C16H14O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

血漿游離基因組DNA提取試劑盒   Plasma free genomic DNA Exaction Kit  Panaxyne  中文名：  分子式：C14H20O2  度：97.0%
20-Hydroxyecdysone  中文名：20-羥基蛻皮甾酮  分子式：C27H44O7  度：98.0%  兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Stigmasterol glucoside  中文名：  分子式：C35H58O6  度：97.0%  兔抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Stigmastane-3,6-diol  中文名：  分子式：C29H52O2  度：%  兔抗糖蛋白抗體elisa試劑盒   兔抗糖蛋白抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔抗糖蛋白抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗糖蛋白抗體試劑盒、兔抗糖蛋白抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

17α-Thevebioside  中文名：  分子式：C36H56O13  度：%  兔抗平滑肌抗體elisa試劑盒   兔抗平滑肌抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔抗平滑肌抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗平滑肌抗體試劑盒、兔抗平滑肌抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

α-Spinasterol acetate  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2  度：96.0%  兔抗凝血酶elisa試劑盒   兔抗凝血酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔抗凝血酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗凝血酶試劑盒、兔抗凝血酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)上腺素   英文名稱：   Adrenalin/   英文縮寫(xiě)：   ADR   規(guī)格：   48T/96T  3-Hydroxycatalponol  265644-24-4  中文名：  分子式：C15H18O3  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  四氫萘酮; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

上皮鈣粘蛋白   英文名稱：   Human E.cadherin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   E.cn  2''-O-Acetylsprengerinin C  中文名：  分子式：C46H72O17  度：%

山羊樣生長(zhǎng)因子1（IGF-1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  3-Cyclopropylmethoxy-4-difluoromethoxybenzoic acid  162401-62-9  中文名：  分子式：C12H12F2O4 

山羊   英文名稱：   lnsulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   INS  3-Ethoxyandrosta-3,5-dien-17-one  中文名：3-乙氧基-雄甾-3,5-二烯-17-酮  分子式：C21H30O2 

山羊血小板衍化生長(zhǎng)因子（PDGF）ELISA試劑盒         組裝/原裝  3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)nitrobenzene  中文名：  分子式：C13H9ClFNO3  度：98.0%

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無(wú)菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開(kāi)， 內(nèi)膜面向上，無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。