產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BK-P64000 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
包裝規(guī)格 | 50T |
純度 | 詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)% |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
沙門(mén)氏菌SPP-specPCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
50T |
BK-P64000 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品:用無(wú)菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
小鼠樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 N,N'-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine 152120-54-2 中文名:N,N'-二叔丁氧羰基-1H-吡唑-1-甲脒 分子式:C14H22N4O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
小鼠樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISAKit ELISA. 96T/48T Manidipine di 89226-75-5 中文名:鹽酸馬尼地平 分子式:C35H40Cl2N4O6
小鼠樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 N,N'-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine 152120-54-2 中文名:N,N'-二叔丁氧羰基-1H-吡唑-1-甲脒 分子式:C14H22N4O4
小鼠樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISAKit ELISA. 96T/48T N,N'-Bis(2-hydroxyethyl)oxamide 中文名:N,N'-雙(2-羥乙基)草酰胺 分子式:C6H12N2O4 度:98.0%
小鼠受體β(ISR-β)ELISAKit ELISA.
96T/48T N6-Benzoyladenine 4005-49-6 中文名:N6-苯甲酰基腺嘌呤 分子式:C12H9N5O
EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞(彝族);HYLD-鹽酸伐昔洛韋D-Valacyclovir 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
大鼠肝細(xì)胞瘤;H4-II-E-C3 腺癌細(xì)胞,CW-2細(xì)胞 R1610細(xì)胞,中國(guó)倉(cāng)鼠倉(cāng)鼠肺細(xì)胞伐昔洛韋雜質(zhì)FValacyclovir Impurity F質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
BPH-1, 細(xì)胞 Human4,5-二氯熒光素(>98%,BR)4,5-Dichlorofluorescein質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
ICOSLG Others Human ICOSLG / B7-H2 / ICOSL / CD275 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 對(duì)乙氧基苯(>98%,BR)4-Ethoxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
滑膜細(xì)胞培養(yǎng)基SM4-羥基(>98%,BR)4-Hydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠肺平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL苔酚葡萄糖苷;地衣二醇葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Orcinol glucosid質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
C6/36細(xì)胞,蚊子細(xì)胞 A-704(細(xì)胞) 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A短葶山麥冬皂苷C(標(biāo)準(zhǔn)品)Liriope muscari baily saponins C質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD)百兩金素A(標(biāo)準(zhǔn)品)Ardisiacrispin A質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
L-O2(正常肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 角膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)柳穿魚(yú)黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)Pectolinarigenin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基MCM-prf瓜子金皂苷己(標(biāo)準(zhǔn)品)Polygalasaponin F質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
2-Amino-6-chlorobenzothiazole 中文名:2-氨基-6-氯苯并噻唑 分子式:C7H5ClN2S 內(nèi)皮細(xì)胞合酶 (eNOS) 作用:
ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝
2-Amino-5-nitrothiazole 中文名:2-氨基-5-硝基噻唑 分子式:C3H3N3O2S 內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor receptor 2 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫(xiě): VEGF-R2
2-Amino-5-nitrobenzophenone 中文名:2-氨基-5-硝基二苯甲酮 分子式:C13H10N2O3 內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3 英文名稱: vascuiar endothelial growth factor receptor 3 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫(xiě): VEGF-R3
2-Amino-5-mercapto-1,3,4-thiadiazole 中文名:2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑 分子式:C2H3N3S2 活性腸肽 英文名稱: vasoactine inestinal peptide 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫(xiě): VIP
2-Amino-5-chlorobenzophenone 中文名:2-氨基-5-氯二苯甲酮 分子式:C13H10ClNO 內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素 英文名稱: Visfatin 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫(xiě): Visfatin
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative
real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對(duì)定量)和定性分析。
沙門(mén)氏菌SPP-specPCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR