產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP3237 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
滅鮭氣單胞菌PCR檢測試劑盒直銷 | Aeromonas salmonicidaPCR | BKP3237 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:滅鮭氣單胞菌PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Stavudine 3056-17-5 中文名:司他夫定 分子式:C10H12N2O4 HumanAi-SomaticMuscleAibody,ASAELISAKit 人抗骨骼肌抗體(ASA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Albendazole 54965-21-8 中文名:阿苯達(dá)唑 分子式:C12H15N3O2S Humancytokeratin20,CK-20ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白20(CK-20)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine 175291-56-2 中文名:Fmoc-蘇氨酸磷酸芐酯 分子式:C26H26NO8P 組織HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性檢測試劑盒20次
8-Phenyloctanol 10472-97-6 中文名:8-苯基辛醇 分子式:C14H22O HumanPlateletFactor4,PF-4ELISAKit人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
8-Phenyloctanoic acid 26547-51-3 中文名:8-苯基辛酸 分子式:C14H20O2 兔子脂聯(lián)素(ADP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Deoxycholic acid 83-44-3 中文名:去氧膽酸 分子式:C24H40O4 Human neonatal thyroid stimulating hormone (N-TSH) ELISA Kit 人新生兒促甲狀腺素(N-TSH)ELISA試劑盒
Timosaponin AIII 41059-79-4 中文名:知母皂苷AIII 分子式:C39H64O13 Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit 人抗多發(fā)性肌炎抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Diosgenin 512-04-9 中文名:薯蕷皂苷元 分子式:C27H42O3 HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA試劑盒人腺來源的內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Sarsasapogenin 126-19-2 中文名:菝葜皂苷元 分子式:C27H44O3 組織PIM2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Makisterone A 20,22-monoacetonide 245323-24-4 中文名: 分子式:C31H50O7 humanPepsinogenA,PG-AELISAKit人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
滅鮭氣單胞菌PCR檢測試劑盒直銷1--4-正辛基苯(>98.0%(GC)) 1-Bromo-4-n-octylbenzene 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 英文名稱RatThyroglobulinELISAKit大鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
2,3,6,7,10,11-六甲氧基三亞苯(>95.0%(GC)) 2,3,6,7,10,11-Hexamethoxytriphenylene 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC) 酵母二酚氧化酶(diphenolase)活性比色法定量檢測試劑盒20
2,3,6,7,10,11-六羥基三亞苯水合物(>95.0%(HPLC)) 2,3,6,7,10,11-Hexahydroxytriphenylene Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC) ELISAKitHAase人透明質(zhì)酸酶規(guī)格:48T/96T
2,3,6,7,10,11-六乙酰氧基三亞苯(>98.0%(HPLC)) 2,3,6,7,10,11-Hexaacetoxytriphenylene 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC) 小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒 ,英文名: FⅧAg ELISA Kit
2,3,6,7,10,11-六三亞苯(>98.0%(T)) 2,3,6,7,10,11-Hexabromotriphenylene 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T) 大鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA檢測試劑盒RatTGF-beta-inducibleearlyresponsegene-1,TIEG1ELISAKit 96T/48T
(S)-(-)-1-苯乙醇(>98.0%(GC)) (S)-(-)-2-Methyl-1-butanol 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 人白介素12受體亞基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)試劑盒 Human IL12RB1 ELISA kit
(S)-(+)-4-甲基-1-己醇(>98.0%(GC)) (S)-(+)-4-Methyl-1-hexanol 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 英文名稱MouseFree-TestoteroneELISAKit小鼠游離睪同(Free-Testoterone)規(guī)格:96T/48T
(S)-(+)-5-甲基-1-庚醇(>96.0%(GC)) (S)-(+)-5-Methyl-1-heptanol 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(GC) picricacid-orangeGsolion溶液500毫升
(S)-(+)-6-甲基-1-辛醇(>98.0%(GC)) (S)-(+)-6-Methyl-1-octanol 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) Rabbit8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2αELISA試劑盒兔8-異構(gòu)素(8-epi-PGF2α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(S)-(+)-2-辛醇(>98.0%(GC)) (S)-(+)-2-Octanol 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 小鼠抵抗素(RETN)ELISA試劑盒 ,英文名: RETN ELISA Kit
CBZ-D-纈氨酸 N-Cbz-D-valine 質(zhì)量規(guī)格:0.98 人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF1A)試劑盒 Human somal cell-derived factor 1 alpha,SDF1A ELISA kit
Z-Arg(Mtr)-OH·CHA Z-Arg(Mtr)-OH·CHA 質(zhì)量規(guī)格:0.98 人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/SDF1B)試劑盒 Human somal cell derived factor 1β,SDF-1β/SDF1B ELISA kit
CBZ-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽;N(ε)-芐氧羰基-L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽 H-Lys(Z)-OMe hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98% 人激動(dòng)異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB(CKMB)試劑盒 Human cytokinin MB,CKMB ELISA Kit
N-CBZ-D-丙氨酸 Z-D-Ala-OH 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人激素敏感性脂肪酶(HSL)試劑盒 Human hormone sensitive lipase,HSL ELISA Kit
BOC-L-丙氨酸 Boc-L-alanine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人激肽釋放酶1(KLK 1)試劑盒 Human Kallikrein 1,KLK 1 ELISA Kit
BOC-L-苯丙氨酸 Boc-L-phenylalanine 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 人激肽釋放酶10(KLK 10)試劑盒 Human Kallikrein 10,KLK 10 ELISA Kit
BOC-甘氨酸 Boc-Glycine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人激肽釋放酶11(KLK 11)試劑盒 Human Kallikrein 11,KLK 11 ELISA Kit
BOC-L-異亮氨酸 Boc-Ile-OH 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 人激肽釋放酶2(hK 2)試劑盒 Human Kallikrein 2,hK 2 ELISA Kit
BOC-L-脯氨酸 Boc-Pro-OH 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 人激肽釋放酶6(KLK 6)試劑盒 Human Kallikrein 6,KLK 6 ELISA Kit
BOC-L-色氨酸 Boc-Trp-OH 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 人激肽釋放酶7(KLK 7)試劑盒 Human Kallikrein 7,KLK 7 ELISA Kit
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。