產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3278 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
曲霉屬通用PCR檢測試劑盒說明書 | Aspergillus spp. PCR | BKP3278 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:曲霉屬通用PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Tetracaine hydrochloride 136-47-0 中文名:鹽酸丁卡因 分子式:C15H25ClN2O2 Human galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 人甘肽/甘素(GAL)ELISA試劑盒
Prilocaine hydrochloride 1786-81-8 中文名:鹽酸丙胺卡因 分子式:C13H21ClN2O rabbitneuroophin4,-4ELISAKit 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(-4)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Dibucaine hydrochloride 1961/12/1 中文名:鹽酸地布卡因 分子式:C20H30ClN3O2 CLIAKitforA(Mouseai-thrombieceptor)ELISAKit小鼠抗凝血酶受體規(guī)格:48T/96T
Ropivacaine hydrochloride 98717-15-8 中文名:鹽酸羅哌卡因 分子式:C17H27ClN2O 線粒體復(fù)合物III蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25次
Drospirenone 67392-87-4 中文名:屈螺酮 分子式:C24H30O3 Rabbitai-Monocyteaibody,AMAELISAKit兔抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Conduritol A 526-87-4 中文名:牛彌菜醇A 分子式:C6H10O4 兔子瘦素(LEP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Neochlorogenic acid 906-33-2 中文名:新綠原酸 分子式:C16H18O9 Human fibromodulin (fgl2) ELISA Kit 人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA試劑盒
Ficaprenol 11 26296-50-4 中文名: 分子式:C55H90O HumanCyclosporineA,CsAELISAKit 人環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Ethyl β-D-ribo-hex-3-ulopyranoside 104953-08-4 中文名: 分子式:C8H14O6 Humandermatansulfate,DSELISA試劑盒人皮膚素(DS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
6-O-Feruloylglucose 137887-25-3 中文名:6-O-阿魏酰葡萄糖 分子式:C16H20O9 組織L-乳酸比色法定量檢測試劑盒20次
曲霉屬通用PCR檢測試劑盒說明書硝酸鈀 Palladium (II) nitrate dihydrate 質(zhì)量規(guī)格:BR 大鼠阿立新A(OrexinA)ELISA檢測試劑盒RatOrexinAELISAKit 96T/48T
鈀粉(>99%,BR) Palladium, powder 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 人白介素1受體相關(guān)激酶1(IRAK1)試劑盒 Human Ierleukin-1 receptor-associated kinase 1,IRAK1 ELISA Kit
乙酸副品紅(>85%,BS) Pararosaniline acetate 質(zhì)量規(guī)格:>85%,BS 英文名稱MouseTumornecrosisfactorαELISAKIT小鼠α(TNFα)ELISAKIT規(guī)格:96T/48T
鈣激活鉀通道阻斷劑來源于覃青霉 Paxilline*, from Penicillium paxilli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC pGBKT7+目的基因酵母雙雜交誘餌
青霉酸(>98% (HPLC),BC) Penicillic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98% (HPLC),BC Porcinethyroopin-releasinghormone,HELISA試劑盒豬促甲狀腺素釋放激素(H)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
青霉素(>95%(HPLC),BC) Penitrem A from Penicillium palitans 質(zhì)量規(guī)格:>95%(HPLC),BC 小鼠泛素(Ub)ELISA試劑盒 ,英文名: Ub ELISA Kit
β-D-半乳糖五乙酸酯(>98%,BR) Pentaacetyl-β-D-galactopyranose 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GL1)ELISA檢測試劑盒HumanGlucoseanspoer1,GL1ELISAKit 96T/48T
人造沸石 Permutit 質(zhì)量規(guī)格:Tech Grade 大鼠(HYD)試劑盒 Rat Hydrocoisone,HYD ELISA Kit
酚肽二四鈉(>96%,BC) Phenolphthalein diphosphate tetra salt 質(zhì)量規(guī)格:>96%,BC 英文名稱RatAEA(IgG,M)ELISAKit大鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(AEA)ELISAKit規(guī)格:96T/48T
吩噻嗪(>98%,BR) Phenothiazine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 技術(shù)平臺操作20樣本
L丙氨酸 HPLC≥98% 200mg Mouseheatshockprotein60,hSP-60ELISA試劑盒小鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L茶氨酸 HPLC≥98% 20mg MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISA試劑盒小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L蛋氨酸(甲硫氨酸) HPLC≥98% 200mg MouseHeatShockProtein90,Hsp-90ELISA試劑盒小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L脯氨酸 HPLC≥99% 200mg MouseHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
甘氨酸 HPLC≥99% 200mg MouseHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISA試劑盒小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L谷氨酸 HPLC≥99% 200mg MouseHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKit小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L谷氨酰胺 HPLC≥98% 200mg MouseHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISA試劑盒小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L瓜氨酸 HPLC≥98% 20mg Mousehemeoxygenase1,HO-1ELISA試劑盒小鼠血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L胱氨酸 HPLC≥99% 200mg Mousehemeoxygenase2,HO-2ELISAKit小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L精氨酸 HPLC≥98% 200mg Mousehemeoxygenase2,HO-2ELISA試劑盒小鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。