產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP3515 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
梭狀芽孢桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng) | Clostridium spp.PCR | BKP3515 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:梭狀芽孢桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
土壤堿性0酸酶(S-AKP/ALP)試劑盒 可見分光光度法 50管/48樣 4-Amino-3-hydroxybenzoic acid 中文名:4-氨基-3-羥基苯甲酸 分子式:C7H7NO3
土壤堿性0酸酶(S-AKP/ALP)測(cè)試盒 可見分光光度法 50管/48樣 4-Aminobenzophenone 1137-41-3 中文名:4-氨基二苯甲酮 分子式:C13H11NO
土壤還原酶(S-)測(cè)試盒 可見分光光度法 50管/24樣 4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid 中文名:4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸 分子式:C10H9NO4S 度:98.0%
土壤多酚氧化酶(PPO)測(cè)試盒 可見分光光度法 50管/48樣 4-Amino-3,5-dichloropyridine 中文名: 分子式:C5H4Cl2N2
土壤銨態(tài)氮測(cè)試盒 可見分光光度法 50管/48樣 Triamcinolone acetonide 中文名:曲安奈德 分子式:C24H31FO6
Ergosterol glucoside 中文名:麥角甾醇葡萄糖苷 分子式:C34H54O6 度:97.5% 兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒
Phyperunolide E 中文名: 分子式:C28H40O9 度:98.0% 兔血清(NO)ELISA試劑盒
Withanolide C 中文名:醉茄內(nèi)酯C 分子式:C28H39ClO7 度:97.5% 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒
Physapruin A 中文名: 分子式:C28H38O7 度:96.5% 兔血凝素樣氧化受體1 英文名稱: Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: LOX-1
4β-Hydroxywithanolide E 中文名:4β-羥基醉茄內(nèi)酯E 分子式:C28H38O8 度:98.0% 兔脂氧合酶同工酶 英文名稱: Rabbit Lipoxygenase Isozymes 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: LOXI
梭狀芽孢桿菌屬通用PCR檢測(cè)試劑盒供應(yīng)SB 203580 SB203580 質(zhì)量規(guī)格:>98%,p38 MAPK抑制劑 英文名稱RatThromboxaneB2ELISAKit大鼠素(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
6-氨基-3-甲基嘌呤(3MA);細(xì)胞自噬抑制劑 3-MA;6-Amino-3-methylpurine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,autophagy inhibitor 寡核苷酸探針非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA斑點(diǎn)雜交完全試劑盒5
黃嘌呤;2,6-二羥基嘌呤; 2,6-Dihydroxypurine;Xanthine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR ELISAKitIGFBP-3人樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3規(guī)格:48T/96T
Necrostatin1 Necrostatin-1 質(zhì)量規(guī)格:>98%,RIP1抑制劑 小鼠激肽釋放酶7(KLK7)ELISA試劑盒 ,英文名: KLK7 ELISA Kit
大豆分離蛋白 Soy protein isolate 質(zhì)量規(guī)格:蛋白含量≥90%,BR 人遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanverylateappearingaigen,VLAELISAKit 96T/48T
L-甲狀腺素鈉鹽五水化合物 L-Thyroxine Salt Pentahydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 大鼠心肌肌鈣蛋白C(TnC)試劑盒 Rat Cardiac oponin C,cTn-C ELISA kit
LY2940680 LY2940680 質(zhì)量規(guī)格:>98% 英文名稱RatTpPELISAKit大鼠前體蛋白(TpP)。規(guī)格:96T/48T
LY2886721 LY-2886721 質(zhì)量規(guī)格:>98,BACE1 inhibitor 寡核苷酸探針非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交完全試劑盒5
利尼伐尼;ABT869 Linifanib (ABT-869) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,VEGFR/PDGFR抑制劑 ELISAKitIGFBP2人樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2規(guī)格:48T/96T
頭孢匹林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Cefapirin 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定 小鼠激肽釋放酶5(KLK5)ELISA試劑盒 ,英文名: KLK5 ELISA Kit
丁香酚 蕓香糖苷 HPLC≥98% 5mg PI-3KINASEP110BETA蛋白共沉淀分析試劑盒5
丁香三環(huán)烷二醇 HPLC≥98% 5mg PICOGREEN雙鏈DNA熒光定量測(cè)定試劑盒20
丁香酸甲酯 HPLC≥98% 5mg PICOGREEN雙鏈DNA熒光定量測(cè)定試劑盒20
豆甾, 二烯– 酮 HPLC≥98% 5mg PICOGREEN細(xì)胞繁殖定量檢測(cè)試劑盒50
豆甾烯,二酮 HPLC≥98% 5mg picricacid-orangeGsolion溶液500毫升
豆甾,二烯醇 HPLC≥98% 5mg Pisumsativumagglinin,PSAELISA試劑盒豌豆凝集素(PSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豆甾醇葡萄糖甙 HPLC≥98% 5mg PI復(fù)染試劑盒50
豆甾烷,二醇 HPLC≥98% 5mg Pla25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA試劑盒植物25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豆甾烷,二酮 HPLC≥98% 5mg Placalmodulin,CAMELISA試劑盒植物鈣調(diào)素(CAM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
杜鵑醇 HPLC≥98% 5mg PlaGibberellicAcid,GAELISA試劑盒植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。