產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3514 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
索氏梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | Clostridium sordelliiPCR | BKP3514 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:索氏梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
突觸核蛋白 英文名稱: Human α Synucleinα 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: α-SYN 4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide 52298-44-9 中文名:4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺 分子式:C14H16N2O4S 度:99.0% 關(guān)鍵詞:
頭孢芐 1g Amprolium hydrochloride 中文名:鹽酸氨丙林 分子式:C14H20Cl2N4 度:98.0%
銅蘭蛋白(CP)檢測 Glamate detection β-Anhydrouzarigenin 3080-20-4 中文名: 分子式:C23H32O3
銅-ATP酶(Cu-ATPase)測定試劑盒(比色法) Repaglinide ethyl ester 147770-06-7 中文名: 分子式:C29H40N2O4
銅(Cu)測定試劑盒(絡(luò)合比色法) Xanthopurpurin 518-83-2 中文名:1,3-二羥基蒽醌 分子式:C14H8O4 度:97.0% 關(guān)鍵詞:
Withaperuvin C 中文名: 分子式:C28H38O7 度:96.5% 兔基質(zhì)金屬蛋白酶 1 英文名稱: Rabbit Maix Metalloproteinase 1 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: MMP-1
Otophylloside O 中文名: 分子式:C56H84O20 度:96.5% 兔基質(zhì)金屬蛋白酶 2 英文名稱: Rabbit Maix Metalloproteinase 2 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: MMP-2
Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside 中文名: 分子式:C56H84O20 度:92.0% 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit
Otophylloside F 中文名:青陽參苷F 分子式:C48H76O16 度:95.0% 兔(NO)ELISAKit
Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside 中文名: 分子式:C56H90O19 度:98.0% 兔補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISAKit
索氏梭狀芽孢桿菌PCR檢測試劑盒說明書頭孢匹林鈉 Cefapirin 質(zhì)量規(guī)格:Content 96.0-102.0%,BR 人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA檢測試劑盒HumanAi-Saccharomycescerevisiaeaibody,ASCAELISAKit 96T/48T
5,7-二氯-8-羥基喹哪啶;氯喹那多 Chlorquinaldol 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒 Rat Cardiac oponin Ⅰ,cTn-Ⅰ ELISA kit
癸氧喹酯;乙癸氧喹酯 Decoquinate 質(zhì)量規(guī)格:>99(T) 英文名稱RatTpPELISAKit大鼠前體蛋白(TpP)。規(guī)格:96T/48T
(S)-2-氨基-5-甲氧基四氫萘鹽酸鹽 (S)-2-Amino-5-methoxytetralin Hydrochloride 質(zhì)量規(guī)格:>98% 寡核苷酸探針非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法RNA北方雜交完全試劑盒5
巴馬司他;BB94 Batimastat(BB-94) 質(zhì)量規(guī)格:>98%,MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑 ELISAKitIGFBP-1人樣生長因子結(jié)合蛋白1規(guī)格:48T/96T
伊洛馬司他(GM6001) Ilomastat,GM6001,Galardin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)抑制劑 小鼠激肽釋放酶4(KLK4)ELISA試劑盒 ,英文名: KLK4 ELISA Kit
愈創(chuàng)木酚縮水甘油醚 Guaiacol glycidyl ether 質(zhì)量規(guī)格:>98% 人抗髓0脂抗體IgA(ai-myelinAb)ELISA檢測試劑盒Humanai-myelinaibodyIgAELISAKit 96T/48T
4-氨基安替比林 4-Aminoantipyrine 質(zhì)量規(guī)格:AR,分析 大鼠腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)試劑盒 Rat adenylyl cyclase 1,AC-1 ELISA Kit
N-代丁二(NBS) N-bromosuccinimide 質(zhì)量規(guī)格:AR 英文名稱RatSerumamyloidAELISAKit大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)規(guī)格:96T/48T
溶葡球菌酶,溶葡萄球菌酶 Lysostaphin 質(zhì)量規(guī)格:BR,5000U/Pack 寡核苷酸探針同位素法DNA斑點(diǎn)雜交完全試劑盒5
丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml) Butachlor solution 質(zhì)量規(guī)格:0.100mg/ml 犬KI-67抗原(MKI67)試劑盒 Dog aigen KI-67,MKI67 ELISA kit
丁草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Butachlor 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,95% 犬N端前腦素(-proBNP)試劑盒 Canine N-terminal pro-brain naiuretic peptide,-proBNP ELISA Kit
丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%) Butachlor solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4% 犬N端前心肽(-ProANP)試劑盒 Dog N-terminal Pro aial naiuretic peptide,-ProANP ELISA kit
丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%) Butachlor solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=7% 犬N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒 Canine N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit
炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品) Buturon 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬P物質(zhì)受體(TACR1)試劑盒 Dog Substance-P receptor,TACR1 ELISA kit
螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%) Bromopropylate solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=2% 犬P選擇素(SELP)試劑盒 Dog P-selectin,SELP ELISA kit
螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%) Bromopropylate solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2% 犬S100B蛋白(S100B)試劑盒 Dog S100 calcium binding protein B,S100B ELISA kit
硝醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Bronopol 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)試劑盒 Canine S100 calcium binding protein A12/Calgranulin-C,S100A12 ELISA Kit
氟草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Benfluralin 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬α-1/2干擾素(IFN-α1/2)試劑盒 Canine Ierferon alpha-1/2 ELISA kit
苯并(k)熒蒽(標(biāo)準(zhǔn)品) Benzo(k)fluoranthene 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 犬α1微球蛋白(α1-MG)試劑盒 Canine α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。