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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號(hào) | BKP3614 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
伊蒙微小菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 | Emmonsia parvaPCR | BKP3614 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：伊蒙微小菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
NRK-52E大鼠腎細(xì)胞 In NRK-52E rat kidney cells DMEM培養(yǎng)基+5%FBS100XDENHARDT'SSOLUTION*DRYICE*DENHARDT'S溶液,100X生物技術(shù)級(jí)50MLFrozen
IFNB1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IFNB1 / IFN-beta / Ierferon beta 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)本安言醋鹽;啊泥林鹽;言醋本安 cnilinq xy7nochloridq;cnilinq sclt 2014/4/1
HPAC(人胰腺腺泡上皮癌) 5×106cells/瓶×2 短小芽孢桿菌NaphtholAS-TRphosphate奈酚AS-TR嶙酸酯5克AR，99%
角膜內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)甘酸鈣100克
GRK5 Others Human 人 GRK5 / GPRK5 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Aprotinin 6ku/25ku Usbio分裝
豬小腸上皮細(xì)胞;ZYM-DIEC02正辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))n-Octanoic acid質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)
CDH13 Others Rat 大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 十八烷(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Octadecane質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥99.5% (GC)
組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1ml仲辛醇(Standard for GC,≥99.5%(GC))2-Octanol質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)
BS-C-1細(xì)胞，非洲綠猴腎細(xì)胞 人導(dǎo)管瘤細(xì)胞,UACC812細(xì)胞 人腦膜細(xì)胞裂解物HMCL二十八烷(standard for GC,≥98.5%(GC))Octacosane質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥98.5%(GC)
猴腎細(xì)胞;Vero IgCD4草酸(Standard for GC,≥99.6%)Oxalic acid dihydrate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.6%
伊蒙微小菌PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書人成纖維細(xì)胞裂解物HLFL氘代鹽酸(5g )Deuterium Chloride質(zhì)量規(guī)格：D, 99.5% DCL 20% IN D2O
EDNRB Others Human 人 EDNRB / Endothelin B Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 氘代鹽酸(5g )Deuterium Chloride質(zhì)量規(guī)格：D, 99.5% DCL 35% IN D2O
人癌細(xì)胞;MDA-MB-468氘代鹽酸(10g)Deuterium Chloride質(zhì)量規(guī)格：D, 99.5% DCL 20% IN D2O
tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-3C3 彈性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL氘代鹽酸(10g)Deuterium Chloride質(zhì)量規(guī)格：D, 99.5% DCL 35% IN D2O
SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐藥細(xì)胞株 Human氘代鹽酸(50g)Deuterium Chloride質(zhì)量規(guī)格：D, 99.5% DCL 20% IN D2O
大鼠細(xì)胞;RH-35Lead(IV)acetate四1克CP，98.5%
SPC-A-1細(xì)胞， 人細(xì)胞,HB細(xì)胞 tTA基因修飾的小鼠(B類);P19-CAG-tTA-1D33,5-二酚;間-5-二本酚; 5-羌基間二本; 隊(duì)稱間二本酚; 1,3-二本-5-酚; 3,5-二本-1-酚; 1,3,5-二本酚; 1-羌基-3,5-二本; 1,3-二基-5-羌基本 3,5-DiMqthylphqnol;3,5-Xylqnol;5-xy7noxy-M-xylqnq; syM-M-Xylqnol;1,3-Xylqn-5-ol;3,5-Xylqn-1-ol;M-5-Xylqnol;1,3,5-Xylqnol;1-xy7noxy-3,5-diMqthylbqnzqnq; 1,3-DiMqthyl-5-xy7noxybqnzqnq; 108-68-9
雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3IPM十四酸異酯1公斤高，98%
PVRL2 Others Mouse 小鼠 CD112 / PVRL2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 干酪素shēng huà shì jì容量：100克
人腦微內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HBMECL≥99%ezepenzene
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
