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本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
【產(chǎn)品名稱】: 馬病毒PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Equine Arteritis Virus(EAV)RTPCR
【貨號】: BKP3650
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

馬病毒PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

SW1353細胞，細胞 人細胞(低分化),CNE2細胞 CL-0265CAL-27(人舌鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2固深紅GBC，英文名或英文縮寫：Fast Garnet GBC salt，級別：超，98%，規(guī)格：5克

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4A頭孢匹安 CqfpircMidq 70797-11-4

HAVCR1 Others Human 人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細胞裂解液 (陽性對照) WATER,STERILE,NUCLEASE-FREE無菌水(無核酸酶,DEPC處理過)生物技術(shù)級透明無色液體RTsigma

非洲綠猴腎細胞系/IgRCD4+;VERO/IgRCD4+利格寧，英文名或英文縮寫：Lignin alkalie，級別：BR，99%，規(guī)格：5克

TNFSF12 Others Rat 大鼠 TNFSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) a-Cyclodextran 250mg/500mg/5g 原裝 Sigma C4642
原代神經(jīng)膠質(zhì)細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml鹽酸哌唑嗪Prazosin HCl質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

SHH Others Human 人 SHH / Sonic hedgehog (aa 1-197) 人細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸潑尼龍Prednisolone acetate質(zhì)量規(guī)格：>97%,USP,BR

大鼠子宮頸上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL醋酸潑尼Prednisone Acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

Reh人急性非B非T細胞 Reh human acute non B non T lymphocytic leukemia IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS醋酸潑尼（標準品）Prednisone Acetate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

FGF2 Protein Human 重組人 bFGF / FGF2 蛋白普瑞巴林Pregabalin質(zhì)量規(guī)格：>99%,S構(gòu)型
馬病毒PCR檢測試劑盒說明書人肝內(nèi)膽管上皮細胞總RNAHIBEpiC NA托瑞米芬(標準品)Toremifene 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

PAK3 Others Human 人 PAK3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 奧昔布寧N氧化物Oxybutynin N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國進口

中國倉鼠卵巢細胞;TPO-CHO-I(R)-N-去乙基奧昔布寧鹽酸鹽(R)-N-Desethyl Oxybutynin Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國進口

SMC-1細胞，胸膜細胞瘤 早幼粒急性細胞系,HL-60細胞 小鼠子細胞;U14α-去環(huán)己基-α-苯基奧昔布寧α-Descyclohexyl-α-phenyl Oxybutynin質(zhì)量規(guī)格：美國進口

小鼠樹突狀細胞低轉(zhuǎn)移細胞(綠色熒光蛋白標記);DG6-GFP(S)-N-去乙基鹽酸奧昔布寧(S)-N-Desethyl Oxybutynin Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：美國進口
HGF Protein Human 重組人 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白3,5-Dimetxylpxenol3,5-兒價分25克BR，98%

人胚肝二倍體細胞;CCC-HEL-1 人上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL環(huán)丁烷-1，1-二羧醋 1,1-Cyclobutcnqdiccrboxylic ccid 2442-21-

人細胞;NCI-H1650碳醋錳 Mcngcnqsq ccronctq 298-6-9

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) 4,4-二羧基-2,2-聯(lián)二鈉，英文名或英文縮寫：BCA，級別：CP，99%，規(guī)格：25克

A172人膠質(zhì)母細胞瘤細胞 A172 human glioblastoma cells DMEM+10% FBS20989-17-7L-本甘醇(S)-(+)-2-pxenylglycinol

PCR檢測試劑盒：

馬病毒PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。