產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3667 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
絲菌屬通用PCR檢測試劑盒供應 | Erysipelothrix sppPCR | BKP3667 |
技術服務內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:絲菌屬通用PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
ERBB3 Others Mouse 小鼠 HER3 / ErbB3 人細胞裂解液 (陽性對照) FISHGELATINBLOCKINGBUFFER,10%魚明膠阻斷試劑蛋白組學級100mlCOLD
Hep G2 人細胞雙(1,5-環(huán)忻二1)鎳(-20`C) BIS(1,5-CYCLOOCTcDIqNq)NICKqL(0) 192-32-8
SW 982 [SW-982, SW982]人滑膜細胞 SW 982 [SW-982, SW982] human synovial sarcoma cells L-15(GIBCO)+10%FBSISOPROPYLALCOHOL異生物技術級4LRT
內(nèi)皮生長因子乙酸正酯shēng huà shì jì容量:RT1克
大鼠腹部脊髓神經(jīng)元(RVSCI)(1×106) HNE2, 人細胞系 Human(抑胃肽)
敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21酸棗仁皂苷B(標準品)Jujuboside B質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
F11R Others Human 人 JAM-A 人細胞裂解液 (陽性對照) 穗花杉雙黃酮(標準品)Amentoflavone質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
外周血白細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)梭砂貝母堿(標準品)Hupehenine質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
CD300A Others Human 人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) 特女貞苷(標準品)Specnuezhenide質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
NR8383 大鼠肺泡巨噬細胞天麻素(標準品)Gastrodin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
絲菌屬通用PCR檢測試劑盒供應A-375(人惡性色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2N-琥珀基-7-羥基-3-羧酸酯(>95.0%(HPLC)(T))N-Succinimidyl 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylate質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)(T)
BACE1 Others Human 人 BACE1 / ASP2 人細胞裂解液 (陽性對照) N-琥珀基-7-甲氧基-3-羧酸酯(>98.0%(HPLC)(N))N-Succinimidyl 7-Methoxycoumarin-3-carboxylate質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)
羅猴胎腎細胞;MA1047-二去甲基米諾環(huán)素二鹽酸7-Didemethyl Minocycline Dihydrochloride質(zhì)量規(guī)格:美國進口
CALCB Others Human 人 CALCB / CGPR / Calcitonin 2 人細胞裂解液 (陽性對照) 咪唑立賓鹽酸鹽Mizoribine Hydrobromide質(zhì)量規(guī)格:美國進口
小梁網(wǎng)細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)硝苯地平-d6Nifedipine-d6質(zhì)量規(guī)格:美國進口
RBE(人細胞) 5×106cells/瓶×24-磺酰杯[6]芳烴水和物(>95.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)4-Sulfocalix[6]arene Hydrate
Promocell C-28052 DC Generation Medium DXF,樹突狀細胞生成培養(yǎng)基DXF(即用型) 250ml4-磺酸杯[8]芳烴水合物(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)4-Sulfocalix[8]arene Hydrate
人牙周膜成纖維細胞總RNAHPLF NA4-叔丁基杯[4]芳烴-O,O',O'',O'''-四乙酸四乙酯(>96.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(HPLC)Tetraethyl 4-tert-Butylcalix[4]arene-O,O',O'',O'''-tetraacetate
ITGAX & ITGB2 Others Human 人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-叔丁基硫雜杯[4]芳烴(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)4-tert-Butylthiacalix[4]arene
KYSE410 人細胞4-對乙酰氨基酚硫酸鉀鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進口4-Acetaminophen Sulfate Potassium Salt
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。