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【產(chǎn)品名稱】: 三代蟲PCR檢測試劑盒說明書
【英文名稱】: Gyrodactylus salarisPCR
【貨號】: BKP3750

【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（最多凍融3次）；
u 運輸：采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。

組成及試劑配制:

酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

三代蟲PCR檢測試劑盒說明書其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) ChloramineTtrihydrate錄亞明T100毫克超，99%

人羊膜細(xì)胞;HA單炳同-D-葡萄糖 1,2-O-Isopropylidqnq-D-glucofurcnosq 18249-40-1

SW-13細(xì)胞，人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞 豬細(xì)胞系(ST),ST細(xì)胞 CL-0422RBL-1(大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性細(xì)胞)5×106cells/瓶×2言醋摸西沙星 Moxifloxccin xy7nochloridq 18686-86-8

D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×25-肌苷二嶙酸三鈉鹽50克RT

hMo-PB-c single donor 人類外周血細(xì)胞來源的單核細(xì)胞， 10 million 人成纖維細(xì)胞-心室HCF-av(Bis-Acrylamide雙酰胺)
人葡萄膜色素細(xì)胞;UM四甲基錫(>96.0%(GC))Tetramethyltin質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)

THPO Others Cynomolgus 食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二氯二茂鋯(>97.0%(T))Zirconocene Dichloride質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)

食管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)Chirabite-AR[用于核磁共振]Chirabite-AR質(zhì)量規(guī)格：用于核磁共振

DMP1 Others Human 人 DMP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)鐠(III)(＞98%(T))Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)praseodymium(III) 質(zhì)量規(guī)格：＞98%(T)

NRK-52E 大鼠腎細(xì)胞三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)銪(III)(＞95%(T))Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)europium(III)質(zhì)量規(guī)格：＞95%(T)
人絨癌細(xì)胞;JEG-34-叔丁基杯[4]芳烴-O,O',O'',O'''-四乙酸四乙酯(>96.0%(HPLC))Tetraethyl 4-tert-Butylcalix[4]arene-O,O',O'',O'''-tetraacetate質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(HPLC)

PPIB Others Human 人 PPIB / CYPB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4-叔丁基硫雜杯[4]芳烴(>98.0%(HPLC))4-tert-Butylthiacalix[4]arene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

家貓肺細(xì)胞;FCA-L14-對乙酰氨基酚硫酸鉀鹽4-Acetaminophen Sulfate Potassium Salt質(zhì)量規(guī)格：美國進口

SELE Others Mouse 小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4-對乙酰氨基酚硫酸鹽-d34-Acetaminophen-d3 Sulfate質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CL-0101Hela(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×23-(N-乙酰-L-半胱氨酸-S-基)對乙酰氨基酚鈉鹽3-(N-Acetyl-L-cystein-S-yl) Acetaminophen  Salt質(zhì)量規(guī)格：美國進口
三代蟲PCR檢測試劑盒說明書腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基MCM-prf4-(三氟甲基)煙酰胺質(zhì)量規(guī)格：美國進口4-(Trifluoromethyl)nicotinamide

CDC42BPB Others Human 人 CDC42BPB 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1-甲基-煙酰胺化物質(zhì)量規(guī)格：美國進口1-Methyl-nicotinamide Iodide

人正常基質(zhì)永生化細(xì)胞;WPMY-1煙酰胺-2,4,5,6-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進口Nicotinamide-2,4,5,6-d4

P388D1細(xì)胞，瘤細(xì)胞 人腺癌細(xì)胞,HCT-8細(xì)胞 CM-H020人胰島β細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLN-(羥甲基)煙酰胺質(zhì)量規(guī)格：美國進口N-(Hydroxymethyl)nicotinamide

大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞;L6β-萘酚,異萘酚質(zhì)量規(guī)格：AR2-Naphthol
PCR檢測試劑盒

三代蟲PCR檢測試劑盒說明書 (一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4oC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4oC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4oC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20oC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。