產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3800 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
火雞病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格 | Herpesvirus of | BKP3800 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:火雞病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
IL18BP Others Mouse 小鼠 IL18BP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) H295EstersilH295硅酯500毫升BR,99%
MTT細(xì)胞活力和增殖檢測試劑盒MTT4-羌基本加醋丁酯;隊(duì)羌基本加醋丁酯;泥泊金丁酯 Butyl 4-xy7noxybqnzoctq;4-xy7noxybqnzoic ccid butyl qstqr;Butobqn;Nipcgin;Butylpcrcbqn;Butyl chqMosqpt;Butyl pcrcsqpt 1994/6/8
CD2 Others Canine 狗 CD2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1,8-二氮雙環(huán)[5.4.0... 1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene (≥... 6674-22-2 25ML 通用試劑
人上皮細(xì)胞;Ca SkiTRIS-TAPS-EDTA(TTE)POWDERBLENDTTE緩沖液,10X 粉末包超級1 PackRT
雜交瘤(B類);C3110D2E11 細(xì)胞,Lncap細(xì)胞 H4-II-E-C3細(xì)胞,大鼠肝細(xì)胞瘤6160-65-21,1-硫代羰基二咪唑1,1'-Thiocarbonyldiimidazole
大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)五味子乙素(標(biāo)準(zhǔn)品)Schizandrin B質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS3 細(xì)胞,RH-35細(xì)胞 EL-4細(xì)胞,小鼠瘤五味子酯甲(標(biāo)準(zhǔn)品)Schisantherin A質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人胚胎腸粘膜組織來源細(xì)胞;CCC-HIE-2西貝母堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Sipeimine質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
PVR Others Cynomolgus 食蟹猴 PVR / CD155 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 西紅花苷,α-藏花素(標(biāo)準(zhǔn)品)Crocin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
胎盤絨毛膜細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)西紅花苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)Crocin I質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%,標(biāo)準(zhǔn)品
火雞病毒PCR檢測試劑盒價(jià)格GHR2 金黃地鼠肋骨來源細(xì)胞三七皂苷R2(S型)(標(biāo)準(zhǔn)品)S-Notoginsenoside R2質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥90%,標(biāo)準(zhǔn)品
CM-M030小鼠腸粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL無水醋酸鋅Zinc acetate質(zhì)量規(guī)格:AR
HAVSMC, 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞5-氟吲哚-2-羧酸5-Fluoroindole-2-carboxylic acid質(zhì)量規(guī)格:>98%,原裝進(jìn)口
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0911 人皮下脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL3-環(huán)戊基-L-丙氨酸3-Cyclopentane-L-alanine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基CEpiCMSEA-0400SEA0400質(zhì)量規(guī)格:>98%,鈉離子-鈣離子交換子(NCX)抑制劑
幼蚊細(xì)胞;C6/364-丁氧基鄰苯二甲腈(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)4-Butoxyphthalonitrile
SELE Others Human 人 E-Selectin / CD62E 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1,3-二亞氨基異吲哚啉(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)1,3-Diiminoisoindoline
人羊膜細(xì)胞;WISH4,5-二氯鄰苯二甲腈(>98.0%(GC)(N))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(N)4,5-Dichlorophthalonitrile
CD3D Others Mouse 小鼠 CD3d / CD3 delta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 4-十二烷氧基鄰苯二甲腈(>99.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)4-Dodecyloxyphthalonitrile
人尿道上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL4-叔丁基杯[4]芳烴(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)4-tert-Butylcalix[4]arene
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。