產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3814 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
前病毒PCR檢測試劑盒說明書 | HIV2 Provirus HIV2PCR | BKP3814 |
技術服務內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:前病毒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
FibroFectagen? 成纖維細胞轉染試劑盒,CRYSTALLINE(環(huán)已亞胺)超級100MGCOLD
CD52 Others Rat 大鼠 CD52 / CDW52 人細胞裂解液 (陽性對照) 鄰安基本加醋(易制讀-1) cnthrcnilic ccid 118-9-3
人視網(wǎng)膜色素上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLNystatin制真菌素250毫克BR,魚鱗提取
TMNE細胞,化學轉化小鼠鼻咽上皮細胞 C6(腦細胞) 牛腎細胞;MDBKL-焦谷酸25克
EFNB1 Protein Human 重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His & Fc 標簽)(NAA)
Z-HL16C細胞,人胚突變癌細胞 非洲綠猴腎細胞,COS-6細胞 CL-0074DLD-1(人腺癌細胞)5×106cells/瓶×2去乙酰地爾硫卓Desacetyl Diltiazem質(zhì)量規(guī)格:美國進口
SW620(人細胞) 5×106cells/瓶×2去[5-(2-二甲氨基)乙基]地爾硫卓Des[5-(2-dimethylamino)ethyl] Diltiazem質(zhì)量規(guī)格:美國進口
HPAEC-c 人肺動脈內(nèi)皮細胞(HPAEC) 500,000cells 顱蓋造骨細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)N,N-去二甲基地爾硫卓鹽酸鹽N,N-Didesmethyl Diltiazem Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:美國進口
腎實質(zhì)細胞Many types of cells包裝:5 ×105方(1ml)O-去乙酰-N-去甲基地爾硫卓O-Desacetyl-N-desmethyl Diltiazem質(zhì)量規(guī)格:美國進口
SEMA4A Others Human 人 SEMA4A / Semaphorin-4A 人細胞裂解液 (陽性對照) N-去甲基地爾硫卓鹽酸鹽N-Desmethyl Diltiazem Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:美國進口
前病毒PCR檢測試劑盒說明書THP1細胞,人單核細胞型瘤 人導管瘤細胞,BT-474細胞 非必需氨基酸 100XNEAA4-叔丁基二苯硫(>98.0%(GC))4-tert-Butyldiphenyl Sulfide質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
非洲綠猴腎細胞;VERO雙(4-羥苯基)硫(>98.0%(GC))Bis(4-hydroxyphenyl) Sulfide質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
IL18BP Others Human 人 IL18BPa 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-(二乙基氨基)苯二苯腙(>98.0%(HPLC)(N))4-(Diethylamino)benzaldehyde Diphenylhydrazone質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)
猴腎細胞;vero IgRCD4-1,1'-二萘胺(>98.0%(HPLC)(N))1,1'-Dinaphthylamine質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)
IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,2'-二萘胺(>98.0%(GC))2,2'-Dinaphthylamine質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
F9 小鼠γ-球蛋白(牛)shēng huà shì jì容量:100克
SIGIRR Others Human 人 SIGIRR / TIR8 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-(二環(huán)己基膦基)-1-本基吲哚 95% (NMR) 2-(Dicyclohqxylphosphino)-1-phqnylindolq 740812-36-2
人臍內(nèi)皮細胞;HUV-EC鋁片shēng huà shì jì容量:RT500克
PSG6 Others Human 人 PSG6 / PSG10 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Na-本甲酰-L-精酰胺鹽酸鹽shēng huà shì jì容量:25毫克
CL-0302PA319(人細胞)5×106cells/瓶×27579-20-63-基-4-羧酸3-Aminoisonicotinic acid
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。