產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3882 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
甲型病毒107亞型PCR檢測試劑盒說明書 | Influenza Virus AH10N7RTPCR | BKP3882 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:甲型病毒107亞型PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;AAV-2932,5-二羥基本酸shēng huà shì jì容量:25克
HONE1細(xì)胞,人細(xì)胞 小鼠瘤細(xì)胞,EL4.IL-2細(xì)胞 CM-H030人外周血白細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL二十七烷 Heptacosane,≥98.0% 593-49-7 1G 通用試劑
NG108-15(小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)之融合細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2格拉司瓊相關(guān)物質(zhì)A Grcnisqtron Rqlctqd CoMpound c;2-Mqthyl-N-[(1R,3r,5S)-9-Mqthyl-9-czcbicyclo[3.3.1]non-3-yl]-2H-indczolq-3-ccrboxcMidq 1747-4-8
Promocell C-26040 Placeal Epithelial CellGrowth Medium, 胎盤上皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500mlYEASTEXTRACT,BACTERIOLOGICAL酵母粉細(xì)菌學(xué)級粉末RT不sigma
成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基-2(用于心肌成纖維細(xì)胞)FM-2124-17-4二乙二醇丁醋酸酯2-(2-Butoxyethoxy)etxyl acetate
P388D1(小鼠樣瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢唑啉鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Cefazolin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(HNP抗性);HNP MEF(CF-1)哌拉西林鈉Piperacillin 質(zhì)量規(guī)格:>900μg//mg,USP,BR
CHODL Others Mouse 小鼠 CHODL / CHOndrolectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 哌拉西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Piperacillin 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
LNCaP 環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺Ciclopirox Olamine質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
Hs 578T人癌細(xì)胞 Hs human breast cancer cell line 578T DMEM+10%FBS環(huán)吡司胺; 環(huán)吡酮胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Ciclopirox Olamine質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
甲型病毒107亞型PCR檢測試劑盒說明書Promocell C-23061 Skeletal Muscle CellDiffereiation Medium, 骨骼肌細(xì)胞分化培養(yǎng)基(即用型) 500ml甘氨酸-DL-亮氨酸Glycyl-DL-leucine質(zhì)量規(guī)格:進分
前脂肪細(xì)胞分化生長添加物PAdDSL-高脯氨酸L-Pipecolic acid 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
SELP Others Mouse 小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-正纈氨酸L-Norvaline質(zhì)量規(guī)格:99%,BR
人細(xì)胞;LNCaPL-叔亮氨酸L-tert-Leucine質(zhì)量規(guī)格:0.99
HuH7-HCV細(xì)胞,人感染HCV細(xì)胞 小鼠癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞,MA-891細(xì)胞 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7L-茶氨酸L-Theanine質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR
T24, 人細(xì)胞 胚癌細(xì)胞,Pcc4細(xì)胞 NCI-H1299(人細(xì)胞)十一醛shēng huà shì jì容量:25克
綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠子細(xì)胞;U14-GFP2,6-二錄醌-4-錄亞安 2,6-Dichloroinoneonq-4-chloroimidq 101-38-
FGFR3 Others Mouse 小鼠 FGFR3 / CD333 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 四甘醇,英文名或英文縮寫:TEG,級別:AR,98.5%,規(guī)格:5克
人皮膚成纖維樣細(xì)胞;HSF2葡萄球菌選擇性瓊脂shēng huà shì jì容量:1克
人腸平滑肌細(xì)胞(HISMC)( 5×105 )7752-82-12-基-5-溴嘧啶2-Amino-5-bromopyrimidine
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。