產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3835 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
人病毒通用·PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Human Papillomavirus (HPV)·PCR | BKP3835 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:人病毒通用·PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
大鼠癌細胞;MADB106T4RNALigaseT4 RNA連接酶25克BR
CARTPT Others Human 人 CART / CARTPT 人細胞裂解液 (陽性對照) 錄代正炳烷 1-Chloropropcnq 240-24-2
CL-0021ACHN(人細胞)5×106cells/瓶×2KORSER氏枸櫞酸鹽肉湯shēng huà shì jì容量:RT5米
HEC-1-B細胞,人子宮膜腺癌細胞 人脈絡(luò)叢上皮細胞,HCPEpiC細胞 大鼠雪旺細胞;RSC96Silicone本基甲基硅油III25克ACS,99%
BT-474(人導管癌細胞) 5×106cells/瓶×24-錄本;對錄本4-Chlorobenzoic acid;Chlorodracylic acid
TE-10細胞,人細胞 人腦膠質(zhì)母細胞瘤細胞,TG-905細胞 家貓皮膚細胞;FCA-S1試亞鐵靈Ferroin indicator solution質(zhì)量規(guī)格:AR
Calu-1(人細胞) 5×106cells/瓶×2鈣紅,乙二醛縮雙(鄰氨基酚)Glyoxal-bis(2-hydroxyanil)質(zhì)量規(guī)格:AR;98%
PTPRC Others Human 人 CD45 人細胞裂解液 (陽性對照) 羥基萘酚藍Hydroxynaphthol blue質(zhì)量規(guī)格:金屬滴定指示劑
小鼠前細胞;MFC硼試劑1-Hydroxy-4-p-toluidinoanthraquinone質(zhì)量規(guī)格:AR
人海馬星形膠質(zhì)細胞(HA-h)(1×106)石蕊Litmus質(zhì)量規(guī)格:AR
人病毒通用·PCR檢測試劑盒供應(yīng)T84細胞,人細胞 人色素瘤細胞,NW38細胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0919L-天門冬氨酸1-甲酯L-Aspartic acid 1-methyl ester質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
HCC1937(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2L-天冬氨酸-β-甲酯鹽酸鹽L-Aspartic acid β-methyl ester hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:0.98
ARSA Others Mouse 小鼠 ARSA 人細胞裂解液 (陽性對照) S-甲基-L-半胱氨酸S-Methyl-L-cysteine質(zhì)量規(guī)格:98%,進口分包
人Burkkit瘤細胞;DaudiS-三苯甲基-L-半胱氨酸S-Trityl-L-cysteine質(zhì)量規(guī)格:>98%
CTNNB1 Others Mouse 小鼠 beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) L-谷氨酸1-甲酯L-Glutamic Acid 1-Methyl Ester質(zhì)量規(guī)格:0.97
HPAEC細胞,人肺動脈內(nèi)皮細胞 猴腎細胞系,BSC-1細胞 CL-0082F9(小鼠)5×106cells/瓶×2木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標準品Luteolin 7-O-glucuronide
SW626(人細胞) 5×106cells/瓶×2STA-9090;STA9090質(zhì)量規(guī)格:>98%,HSP90抑制劑Ganetespib
HAoEC-c 人主動脈內(nèi)皮細胞(HAoEC) 500,000cells 腦成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)赤芝酸D質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97%Lucidenic acid D
腎動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)DAPT (GSI-IX)質(zhì)量規(guī)格:>98%,γ-secretase抑制劑DAPT (GSI-IX)
MUC1 Others Human 人 Mucin-1 / MUC-1 人細胞裂解液 (陽性對照) XAV-939;NVP-XAV 939質(zhì)量規(guī)格:>98%XAV939