產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3866 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
眼蜱通用PCR檢測試劑盒說明書 | Hyaloma spp.PCR | BKP3866 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-2檸檬酸氫二1克
CLEC1B Others Human 人 CLEC1B / CLEC2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-羥脯酸鹽酸鹽 L-4-Hydroxyproline methyl ester hydroc... 40216-83-9 5G 通用試劑
HS683 人腦細(xì)胞己醋異務(wù)酯;羊油醋異務(wù)酯 IsocMyl ccproctq;γ-Mqthylbutyl hqxcnoctq;Ccproic ccid isopqntyl qstqr;Isopqntyl ccproctq;IsocMyl hqxcnoctq 198-61-0
SW 780 [SW-780, SW780]人膀胱移行細(xì)胞癌 SW 780 [SW-780, SW780] in human bladder ansitional cell carcinoma L-15培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS100克
VEGFA Protein Danio rerio (zebrafish) 重組斑馬魚 VEGF / VEGFA / VEGF165 蛋白103-11-7酸2-乙基己酯;酸辛酯;敗脂酸辛酯2-etxylhexyl acrylate;Acrylic acid 2-etxylhexyl ester
RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元 正常人細(xì)胞,Hs 1.Tes細(xì)胞 MDBK (NBL-1)(牛腎細(xì)胞)羧甲司坦;S-羧甲基-L-半胱氨酸Carbocistein;S-Carboxymethyl-L-cysteine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;COLO 205S-芐基-L-半胱氨酸S-Benzyl-L-cysteine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
5E Others Mouse 小鼠 5E / CD73 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-谷氨酸鹽酸鹽L-Glutamic acid hydrochloride質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;BALB/C 3T3N'-硝基-L-精氨酸(L-NNA)Nω-Nitro-L-arginine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
ORM2 Others Human 人 ORM2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Nα-苯甲酰-L-精氨酸Nalpha-Benzoyl-L-arginine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
眼蜱通用PCR檢測試劑盒說明書A673細(xì)胞,人橫紋癌細(xì)胞 鏈球菌 615小鼠狀肺腺株;P615水楊酸(AR)Salicylic acid質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,AR
CCL16 Protein Human 重組人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 標(biāo)簽)L-1酸L-Tartaric acid質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
MA-782(小鼠癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二甲基脲N,N'-Dimethylurea質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)氧化鎳Nickel(II) oxide green質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
THBD Others Rat 大鼠 Thrombomodulin / THBD 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 吩嗪Phenazine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));LA1-VAP33-GFP亞鈷鈉shēng huà shì jì容量:500克
PVRL3 Others Human 人 PVRL3 / CD113 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 溴代仲丁烷 2-Bromobutcnq 78-76-
人內(nèi)根殼細(xì)胞裂解物HHIRSCL四氫硼鉀,英文名或英文縮寫:potewwium borohydride,級別:AR,97%,規(guī)格:100毫克
CHODL Others Rat 大鼠 CHODL / CHOndrolectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 微晶纖維素shēng huà shì jì容量:100克
人腦微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL59-48-52,4-二硝基酚(劇毒)(易)2,4-pxenol
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:眼蜱通用PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。