產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3893 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
甲型病毒6亞型PCR檢測試劑盒直銷 | Influenza Virus AH6RTPCR | BKP3893 |
技術服務內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:甲型病毒6亞型PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基MSCMREADYLADDER100BP,DNAMARKERDNA Markers生物技術級不透明,深紫色液體FROZENsigma
FCAR Others Rat 大鼠 FCAR / CD89 人細胞裂解液 (陽性對照) L-甘露糖 L-Mannose,99% 10030-80-5 250MG 通用試劑
GHS1 金黃地鼠皮膚成纖維細胞改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 FUNGI cGcR BcSq MODIFIqD KIMMIG
CM-M022小鼠甲狀腺上皮細胞完全培養(yǎng)基100mL堿性嶙酸酯酶,英文名或英文縮寫:CIAP,級別:BR,RZ>3,≥300u/mg,規(guī)格:5克
LX-2, 人肝星形細胞株7 300目(易)
NG108-15[108CC15]細胞,小鼠神經(jīng)細胞瘤與大鼠神經(jīng)之融合細胞 人細胞,Colo205細胞 高背鯽魚尾鰭細胞;GBJd原兒茶醛,3,4-二羥基苯3,4-Dihydroxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:≥98%
大鼠氣管上皮細胞;RTE原兒茶醛(標準品)3,4-Dihydroxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
PDPN Others Mouse 小鼠 Podoplanin 人細胞裂解液 (陽性對照) 甲砜霉素甘氨酸酯鹽酸鹽Thiamphenicol glycinate HCl質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
周邊細胞培養(yǎng)基PM2.4-二羥基-6-甲基-煙酸乙酯Ethyl 2,4-dihydroxy-6-methylnicotinate質(zhì)量規(guī)格:>98%
EPHA4 Others Human 人 EPHA4 人細胞裂解液 (陽性對照) 恩拉霉素,持久殺菌素Enduracidin質(zhì)量規(guī)格:BR,含量8%以上
甲型病毒6亞型PCR檢測試劑盒直銷HEp-2細胞,喉表皮樣癌細胞 人食管鱗癌,KYSE70細胞 中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1丹曲林鈉半七水合物Dantrolene, Salt Hemiheptahydrate質(zhì)量規(guī)格:美國進口
tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-1A33-甲氧基地氯雷他定3-Methoxy Desloratadine質(zhì)量規(guī)格:美國進口
HA Others H1N1 甲型 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 異地氯雷他定Iso Desloratadine質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人晶體上皮細胞永生系;SRA01/04(HLE)N-甲基地氯雷他定N-Methyl Desloratadine質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人食道平滑肌細胞 (HESMC)( 5×105 )5-羥基地氯雷他定5-Hydroxy Desloratadine質(zhì)量規(guī)格:美國進口
CCL16 Protein Human 重組人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 標簽)dGMP2′-脫氧鳥苷-5′-單嶙酸二鈉鹽25克BR,98%
LTEP-a-2(人) 5×106cells/瓶×2 人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-十一(烷)同 2-Undqccnonq 2011/1/9
犬腎細胞系/IgR;M/IgRCyanuricchloride2,4,6-三錄-1,3,5-三嗪5克AR,98%
CCL1 Others Mouse 小鼠 I-309 / CCL1 / TCA-3 人細胞裂解液 (陽性對照) ALKPHOS2COMPONENTSYSTEMS堿性嶙酸酶(含酶及稀釋液)生物技術級5000 UnitsCOLD
5637 人細胞313222-87-6PALLADIUM(II) nitnATE HYDRATE
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。