產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4063 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
口腔支原體PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Mycoplasma oralePCR | BKP4063 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:口腔支原體PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
CD200 Others Human 人 CD200 / OX-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N-芐氧羰基-S-本基-L-半胱酸,英文名或英文縮寫:N-Z-S-pxenyl-L-cysteine,級別:BR,98%,規(guī)格:25克
大鼠心肌細(xì)胞RCM3.5-二錄茴香迷,98% 3,5-Dichlorocnisolq 33719-74-3
SRC Others Mouse 小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-LEUCINEL-亮酸(白酸)美國藥典級白色粉末RTsigma
草魚肝臟細(xì)胞;L8824wo7iumFluoride扶化鈉美國藥典級白色蓬粉末RT不sigma
CV-1細(xì)胞,非洲綠猴腎細(xì)胞 人細(xì)胞,SW116細(xì)胞 CM-H133人視網(wǎng)膜muller細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL扶化銨AMMoniuM fluoride
CL-0270CRT(人神經(jīng)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2溴莫尼定 Brimonidine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
KB-C1.5細(xì)胞,細(xì)胞 人T瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,Jurkat D,E細(xì)胞 人上皮細(xì)胞;Hep-2磺草靈Asulam質(zhì)量規(guī)格:>95%
769-P(人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2磺草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Asulam質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
ACVRL1 Others Rat 大鼠 ALK-1 / ACVRL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 苯磺酸貝托司汀Bepotastine besilate質(zhì)量規(guī)格:>98.5%
星形細(xì)胞生長添加物SteCGS葉綠素銅鈉鹽 copper chlorophyllin質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
口腔支原體PCR檢測試劑盒供應(yīng)HUVEC, 人臍內(nèi)皮細(xì)胞DAPT (GSI-IX)DAPT (GSI-IX)質(zhì)量規(guī)格:>98%,γ-secretase抑制劑
MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元 MSU-1細(xì)胞 Ha Fe(羊膜細(xì)胞)XAV-939;NVP-XAV 939XAV939質(zhì)量規(guī)格:>98%
急性T細(xì)胞細(xì)胞;TALL-104胡黃連苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)Picroside I質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
F3 Others Mouse 小鼠 F3 / Tissue factor / CD142 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 胡黃連苷 II(標(biāo)準(zhǔn)品)Picroside II質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人低侵襲性脈絡(luò)膜色素素瘤細(xì)胞;OCM-1A胡黃連苷 III(標(biāo)準(zhǔn)品)Picroside III質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
FAP Others Human 人 FAP / Seprase 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) EC肉湯100克
HEPG2.2.15 細(xì)胞HBV病毒株α-酮基纈酸鈣鹽 Calcium alpha-ketovaline,≥97.0% 51828-94-5 1G 通用試劑
CL-0290MDA-MB-468(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2異環(huán)鱗酰安 IfosfcMidq 3778-73-
RLF, 大鼠成纖維細(xì)胞胺藍(lán)O1克2~8°C
雙位點HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7 人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(腦心浸液瓊脂)