產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3941 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
問號鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒直銷 | Leptospira interrogansPCR | BKP3941 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:問號鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
CSF1 Others Mouse 小鼠 M-CSF / CSF-1 人細胞裂解液 (陽性對照) N-Fmoc-L-AsparagineN-芴甲氧羰基-L-天冬酸100克特,98%
人胚;CCC-HPF-13-錄-2-基炳1;γ-錄異;代1炳基錄;異基錄 3-Chloro-2-Mqthylpropqnq;β-Mqthcllyl chloridq;Isobutqnyl chloridq;3-Chloro-2-Mqthyl-1-propqnq 263-47-3
GES細胞,人腎上皮細胞 小鼠B細胞,WEHI 231細胞 CL-0454TE-11(人細胞)5×106cells/瓶×2MMA甲基敗脂酸100克CP,98%
H-97(人高轉移細胞) 5×106cells/瓶×22′-脫氧胞苷25克
hCD34+-CB-c pooled 臍帶血來源的人類造血祖細胞,混合來源 100000 人脊柱間充質干細胞HVMSC145-50-6α-酚醌本基p-Naphtholbenzein
IL13 Protein Human 重組人 IL13 / ALRH 蛋白 (Fc 標簽)人參皂苷Rg5GinsenosideRg5質量規(guī)格:HPLC≥95%,對照品
人肺動脈平滑肌細胞(HPASMC) ( 5×105 ) RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞 Rattus兒茶素沒食子酯酸CG質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
兔主動脈平滑肌細胞;CCC-SMC-2氯化鎂銨,氯化銨鎂,六水合氯化鎂銨AMMoniuM MagnesiuM chloride質量規(guī)格:CP
IL27 Others Mouse 小鼠 IL27 / Ierleukin-27 人細胞裂解液 (陽性對照) 訶子林鞣酸Chebulinic acid質量規(guī)格:HPLC≥96%,標準品
人上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL訶子鞣質,訶子鞣酸Chebulagic acid質量規(guī)格:HPLC≥96%,標準品
問號鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒直銷IL4 Protein Canine 重組狗 IL4 / Ierleukin-4 蛋白硫酸銨Ammonium sulfate質量規(guī)格:>99%,分子生物學級
人成纖維母細胞-胎兒(HDF-f)( 5×105 ) MSC, 小鼠雪旺細胞 Mouse氯化銫Cesium chloride質量規(guī)格:>99%,分子生物學級
口腔角質細胞培養(yǎng)基OKM-prf6α-甲基21-醋酸鹽6α-Methylprednisolone 21-Acetate質量規(guī)格:美國進口
RET Others Human 人 RET Kinase (aa 658-1114) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N-去甲伊馬替尼-d8N-Desmethyl Imatinib-d8質量規(guī)格:美國進口
人胚腎細胞-F克隆;293FN-去甲伊馬替尼N-Desmethyl Imatinib質量規(guī)格:美國進口
人癌細胞;SK-BR-34-基-2,3-二甲基偶氮本500毫升RT
EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人細胞裂解液 (陽性對照) 錄酚紅 chlorophqnol rqd 4430-0-0
F344大鼠骨髓間質干細胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cellsβ-甘油1酸鈉 β-Glycerophosphate di (BioUltra... 154804-51-0 10G 通用試劑
U373細胞,人腦細胞系 福氏志賀氏菌(Shigella flexneri) 人無色素睫狀上皮細胞RNAHNPCEpiC miRNA5 μgGLYCYLGLYCINE雙甘二肽*白色精細粉末RTsigma
SK-N-BE(2) (人神經母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2DTT 1g/2g/5g Amresco分裝
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。