產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3970 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
曼氏桿菌通用PCR檢測試劑盒PCR檢測試劑盒說明書 | Mannheimia spp.PCRPCR | BKP3970 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:曼氏桿菌通用PCR檢測試劑盒PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
FLT1 Others Human 人 FLT1 / VEGFR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-奈酚100毫克
CCD-18Co 正常人組織細胞沉香油醇 Linalool,97% 78-70-6 25ML 通用試劑
CL-0062CHO-K1(倉鼠卵巢細胞亞株)5×106cells/瓶×2乳糖 Lcctosq stcndcrd 10039-6-6
NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系微量可調移液器P2.51克
EB病毒轉化的人B細胞(傣族);KM9405 人大隱平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL7440-5-3PalladiuM
HEL(人紅白細胞細胞) 5×106cells/瓶×2炔雌醇17-β-D-葡萄糖苷酸Ethynyl Estradiol 17-β-D-Glucuronide質量規(guī)格:美國進口
hMSC-UC-c 從臍帶基質提取的的人類間質干細胞(hMSC-UC) 500,000cells 大鼠小膠質細胞RM炔雌醇3-醋酸鹽Ethynyl Estradiol 3-Acetate質量規(guī)格:美國進口
小鼠骨髓細胞;FDC-P1β-雌二醇 3-(β-D-葡萄糖苷酸)鈉鹽β-Estradiol 3-(β-D-glucuronide) salt質量規(guī)格:美國進口
MERTK Others Mouse 小鼠 MERTK / MER 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-羥基炔雌醇2-Hydroxy Ethynyl Estradiol質量規(guī)格:美國進口
MDA-MB-415 人腺癌細胞4-羥基炔雌醇4-Hydroxy Ethynyl Estradiol質量規(guī)格:美國進口
曼氏桿菌通用PCR檢測試劑盒PCR檢測試劑盒說明書大鼠腎小球系膜細胞;HBZY-1亥茅酚苷(標準品)Sec-O-Glucosylhamaudol質量規(guī)格:HPLC≥97%,標準品
RK1 Others Human 人 kA / RK1 人細胞裂解液 (陽性對照) D-谷氨酸D-Glutamic acid質量規(guī)格:0.98
平滑肌細胞培養(yǎng)基SMCMTLCK(進分)Nα-Tosyl-L-lysine chloromethyl ketone HCl質量規(guī)格:進分,sigma T7254
AMBP Others Human 人 AMBP / Alpha 1 microglobulin 人細胞裂解液 (陽性對照) 甘氨酰-L-酪氨酸;甘洛二肽Glycyl-L-tyrosine質量規(guī)格:>98%,BR,水合物
人肝細胞;QSG-7701 [QSG7701]D-亮氨酸D-Leucine質量規(guī)格:>98%,BR
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4B 小鼠L6565克隆細胞系,L6565細胞 RTG細胞,鮭魚胚胎細胞西立伐他汀內酯質量規(guī)格:美國進口Cerivastatin Lactone
人胚胎肌肉組織來源細胞;CCC-HSM-2去甲基西立伐他汀鈉鹽質量規(guī)格:美國進口Desmethyl Cerivastatin, Salt
PVR Others Rat 大鼠 PVR / CD155 / NECL5 人細胞裂解液 (陽性對照) 羥基西立伐他汀鈉鹽質量規(guī)格:美國進口Hydroxy Cerivastatin Salt
視網膜muller細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)去甲基羥基西立伐他汀鈉鹽質量規(guī)格:美國進口Desmethyl Hydroxy Cerivastatin Salt
CD96 Others Human 人 CD96 人細胞裂解液 (陽性對照) 氨芬酸鈉(標準品)質量規(guī)格:含量測定Amfenac
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。