產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4061 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
絲狀支原體絲狀亞種型PCR檢測試劑盒直銷 | Mycoplasma mycoides subsp(mycoides SC)SCPCR | BKP4061 |
技術服務內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:絲狀支原體絲狀亞種型PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
孔雀綠1酸鹽檢測試劑盒MGmP固紅GG鹽shēng huà shì jì容量:1克
PDCD1 Others Rat 大鼠 PD1 / PDCD1 人細胞裂解液 (陽性對照) 2’,3’,4’-三氧基本同 2,3,4-Trixy7noxybqnzophqnonq 1143-7-
人紅系細胞;TF-1十八醇shēng huà shì jì容量:1克
雜交瘤(B類);C3110D2B2 細胞,DU145細胞 H4-ⅡE細胞,大鼠細胞48孔細胞培養(yǎng)板1毫克 保存:-20℃
WM451, 人色素瘤細胞 Human9006-59-1卵蛋白片ALBUMIN, HORSE
CM-H027人成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL左旋氨氯地平/苯磺酸左旋氨氯地平(S)-Amlodipine質(zhì)量規(guī)格:>97%
SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐藥細胞株左旋氨氯地平/苯磺酸左旋氨氯地平(標準品)(S)-Amlodipine質(zhì)量規(guī)格:含量測定
人細胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS] 大鼠肺平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL曲尼司特Tranilast質(zhì)量規(guī)格:>98.0%
子宮內(nèi)膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)曲尼司特(標準品)Tranilast質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標準品
CD53 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD53 (aa 107-181) 人細胞裂解液 (陽性對照) 頭孢羥氨芐 (標準品)CEFADROXIL質(zhì)量規(guī)格:HPLC含量測定用
絲狀支原體絲狀亞種型PCR檢測試劑盒直銷3T6-Swiss albino細胞,胚胎成纖維細胞 人細胞,CaPan-Ⅱ/Capan-2細胞 CM-M040小鼠肝竇內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL丁胺卡那霉素無水Amikacin質(zhì)量規(guī)格:效價:>900 u/mg
正常大鼠腎細胞;NRK氨茶堿(>98%,BR)Aminophyllin hydrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CDH6 Others Human 人 CDH6 / KCAD 人細胞裂解液 (陽性對照) 檸檬酸鉍銨Ammonium bismuth , hydrate質(zhì)量規(guī)格:BR
人脈絡叢成纖維細胞cDNAHCPF cDNA溴化銨(>99%,BR)Ammonium bromide質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
KLK7 Others Mouse 小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 人細胞裂解液 (陽性對照) 化銨(>99%,BR)Ammonium iodide質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
EFNA4 Protein Human 重組人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 (Fc 標簽)D-pxenylglycineetxylesteroHCl(R)-α-基乙酯氫錄化物5克BR,98%
U251(人細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細胞;C3H 10T1/2 2A6燦爛皇 BRILLIcNT YqLLOW 3021-11-4
人腎近曲小管上皮細胞裂解物HRPTEpiCL3,3',5,5'-四甲基聯(lián)... 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine (≥99%,... 54827-17-7 100MG 染色劑
HA Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Decyltrimetxylammoniumbromide(1-癸基)基溴化5克超,99%
小鼠瘤細胞(NK靶細胞);YAC-1L-LysineHCl 100g/250g/Sigma25g 國產(chǎn)
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。