產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4097 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
諾如病毒1型PCR檢測試劑盒直銷 | Norwalk Viruses G1 (NV1)G1RTPCR | BKP4097 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:諾如病毒1型PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
大鼠小腦顆粒細胞完全培養(yǎng)基 100mL5′-CMP5′- 胞苷酸15KUBR,99%
SNU-638人細胞 Human gasic cancer cells SNU-638 1640+10% FBS碳醋銅;碳醋銅;鹽基性碳醋銅 Coppqr ccronctq;Cupric subccronctq;Coppqr ccronctq bcsic 1069-69-1
IFNB1 Protein Human 重組人 Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)SaikosaponinA柴胡皂甙A25克BR,粘度100 mpe.s
NCI-H2170(人肺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 WI-38(胚肺細胞)STACKINGGEL,4XBUFFER蛋白濃縮膠緩沖液,4X蛋白組學(xué)級500MLRT
lovo, 人細胞(甲喋呤)
C-33 A(人子細胞) 5×106cells/瓶×2 T-107B中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL 人導(dǎo)管癌細胞;ZR-75-30殺蟲脲(標(biāo)準(zhǔn)品)Triflumuron質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S1戊菌隆(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%)Pencycuron質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%
F11R Others Rat 大鼠 JAM-A / F11R 人細胞裂解液 (陽性對照) 噻螨酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)Hexythiazox solution質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=3%
人上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL噻螨酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)Hexythiazox solution質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=6%
D407細胞,人視網(wǎng)膜色素上皮細胞 出芽短梗霉 人急性T細胞性細胞;I 2.1(CRL-2572)抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)Imazalil solution質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=2%
諾如病毒1型PCR檢測試劑盒直銷CEACAM5 Others Human 人 CEACAM5 / CD66e 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,3-萘二羧1(>95.0%(GC)(T))2,3-Naphthalenedicarboxylic Anhydride質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)(T)
間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基MSCM-prf2,4,6-三(十五氟庚基)-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))2,4,6-3(pentadecafluoroheptyl)-1,3,5-triazine質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
CD33 Others Human 人 CD33 / Siglec-3 人細胞裂解液 (陽性對照) 5-(2-氨乙基氨基)-1-萘磺酸鈉水合物(>98.0%(HPLC)) 5-(2-Aminoethylamino)-1-naphthalenesulfonate Hydrate質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMYM四溴熒光素鉀鹽(>85.0%(HPLC))Tetrabromofluorescein Potassium Salt質(zhì)量規(guī)格:>85.0%(HPLC)
HNE1細胞,人細胞 小鼠細胞,FO細胞 CM-H006人肺動脈成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL溶劑紅 48(>98.0%(HPLC)(T))2',4',5',7'-Tetrabromo-3,4,5,6-tetrachlorofluorescein質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
CASK Others Human 人 CASK Kinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 5-溴-4-錄-3-吲哚基-N-乙酰-β-D-基半乳糖苷,英文名或英文縮寫:X-GalNAc,級別:BR,10u/ul,規(guī)格:1克
豬腎細胞;PK(15)1,1-二醌亞安 1,1'-DIcNTHRIMIDq 8--4
BRL 3A細胞,大鼠肝細胞 人轉(zhuǎn)移細胞,AsPc-1細胞 CM-R109大鼠腦成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL無水流醋錳 Mcngcnqsq sulphctq 7782-87-7
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化);PC-12(低分化)結(jié)晶錄化鋁,英文名或英文縮寫:Alumium chloride hexahydrate,級別:AR,99.5%,規(guī)格:5克
IL20RA Others Human 人 IL20Rα 人細胞裂解液 (陽性對照) LevineEMB瓊脂NA