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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：石膏樣小孢子菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(HEK293);APP-PS1AMVREVERSETRANSCRIPTASE反轉(zhuǎn)錄酶生物技術(shù)級(jí)FROZENsigma

RKO細(xì)胞，腺癌細(xì)胞 人細(xì)胞系,SUME-a細(xì)胞 CL-0371K7M2 wt(小鼠成骨細(xì)胞)5×106cells/瓶×2;1,4-二羌基丁烷 1,4-Butcnqdiol;1,4-Dixy7noxybutcnq;TqtrcMqthylqnq glycol

中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNA2-糠醋酯 Mqthyl 2-furoctq 611-13-

IL34 Others Mouse 小鼠 IL-34 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 高分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白，英文名或英文縮寫：High range protein MW marker，級(jí)別：BR，10u/mg，規(guī)格：1公斤

U-2 OS, 人細(xì)胞9000-70-8明膠;白明膠;動(dòng)物膠;筋膠;銀明膠Gelatin;Puragel
H9c2(2-1) (大鼠心肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0344HAN(人羊膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 牛腎細(xì)胞;MDBK雙（標(biāo)準(zhǔn)品）Dicoumarol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠成纖維細(xì)胞;φ2水晶蘭苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Monotropein質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

17. 脂肪細(xì)胞系統(tǒng)水仙苷(標(biāo)準(zhǔn)品）Narcissoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CM-R096大鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLOSU03012OSU-03012(AR-12)質(zhì)量規(guī)格：>98%,有效的重組PDK-1抑制劑

小鼠細(xì)胞;L1210 小鼠食管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL斯皮諾素(標(biāo)準(zhǔn)品)Spinosin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
石膏樣小孢子菌PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格TF Others Human 人 ansferrin / TF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) β-胸苷(dT);2'-脫氧胸苷Thymidine 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

牛腦垂體提取物BPEDBD-F [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(HPLC))DBD-F [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole] 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

GAP43 Others Human 人 GAP43 / Neuromodulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) N-(1-芘基)馬來(>97.0%(HPLC))N-(1-Pyrenyl)maleimide質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(HPLC)

CHL-Don 中國(guó)倉鼠肺成纖維樣細(xì)胞愛維莫潘Alvimopan質(zhì)量規(guī)格：刪除；精神管制

CL-0046C4-2(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×23-磺炳基十四烷基二甲甜菜堿Myristyl sulfobetaine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%,BR
C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞(L929-TK-);LTK-異鼠李素-3-O-槐二糖-7-O-鼠李糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Isorhamnetin 3-sophoroside-7-rhamnoside

Chang liver細(xì)胞，CCL13張氏肝細(xì)胞正常 人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(HEK293),APP-PS1細(xì)胞 豚鼠皮膚細(xì)胞;GP-S3(-)-Holostyligone質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品(-)-Holostyligone

Lncap clone FGC(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×25-羧基-X-羅丹明質(zhì)量規(guī)格：>97%5-Carboxy-X- rhodamine; 5-ROX

Promocell C-20111 Keratinocyte GrowthMedium 2 KIT, 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基2型套裝 500ml,丙硫氧嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定Propylthiouracil

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞HAECD-果糖(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品D-Fructose
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。