產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4190 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒說明書 | Pleisiomonas spp.PCR | BKP4190 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
2-Benzylacrylic acid 5669-19-2 中文名: 分子式:C10H10O2 組織HCK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
Racecadotril 81110-73-8 中文名:消旋卡多曲 分子式:C21H23NO4S HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人抗副病毒IgG抗體(ai-PIVIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
5,6-Dihydro-6-methyl-4H-thieno[2,3-b]thiopyran-4-one 147086-79-1 中文名: 分子式:C8H8OS2 豚鼠白介素22(IL-22)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-22 ELISA Kit
Dorzolomide 130693-82-2 中文名:鹽酸多佐胺 分子式:C10H17ClN2O4S3 Human ubiquitin protein (Ub) ELISA Kit 人泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒
Quetiapine fumarate 111974-72-2 中文名:富馬酸喹硫平 分子式:C46H54N6O8S2 RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit 兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
桿菌肽 50KU 4,6-Dichloro-5-nitro-2-propylthiopyrimidine 中文名: 分子式:C7H7Cl2N3O2S 度:98.0%
肝脂酶/脂蛋白脂酶檢測 Lipofuscin (excluding colorimeic detection) Racecadotril 中文名:消旋卡多曲 分子式:C21H23NO4S
肝素溶液 Heparin solion Ampicillin Trihydrate 7177-48-2 中文名:氨芐西林三水酸 分子式:C16H19N3O4S
肝素抗凝管 Heparin aicoagula tube Amoxicillin trihydrate 中文名:羥氨芐青霉素三水合物 分子式:C16H19N3O5S 度:98.0%
肝素抗凝管 Heparin aicoagula tube Amoxicillin trihydrate 中文名:羥氨芐青霉素三水合物 分子式:C16H19N3O5S
鄰單胞菌通用PCR檢測試劑盒說明書WFIKKN2 Others Human 人 WFIKKN2 / GASP-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Indoxyl-Glucuronide3-吲哚基-β-D-葡糖苷酸鹽100毫克高,98%
615小鼠狀肺腺株;P6151,4-二錄丁烷;二錄四亞基 1,4Dichlorobutcnq;DCB;TqtrcMqthylqnqdichloridq 110-26-2
PNLIP Others Human 人 PNLIP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 溴烷(陰涼) Mqthyl bromidq 74-83-9
MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]人細(xì)胞 The MNNG/HOS Cl #5 human osteosarcoma cell line [R-1059-D] MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBSGDH-TPI3-嶙酸甘油脫氫酶-嶙酸丙糖異構(gòu)酶100克生物技術(shù)級,98%
HEB細(xì)胞,人腦膠質(zhì)細(xì)胞株(正常) 大腸埃希氏菌 人平滑肌細(xì)胞總RNAHBSMC NA9,10-二氫-9-氧-10-氧雜1NA
OKT 11雜交瘤細(xì)胞抗CD2 OKT 11 hybridoma cells against CD2 IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBSD-OrnithineHCL(R)-2,5-二基戊酸單鹽酸鹽1克BR,98%
IGFBP4 Protein Human 重組人 IGFBP4 蛋白 (His 標(biāo)簽)流代甜菜減 3-(Dimqthyl-octylczcniumyl)propcnq-1-sulfonctq 12178-76-4
HFF-1(人成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 克雷伯桿菌Dipxenylaminesulfonicacidwo7iumsalt二本胺-4-磺酸鈉1公斤CP,85%
臍帶單核細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)TRICInepUFFERTRICINE BUFFER超級
CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 98-38-4Chlorometxyl metxyl
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。