產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4240 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
普通變形桿菌PCR檢測試劑盒價(jià)格 | Proteus vulgarisPCR | BKP4240 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:普通變形桿菌PCR檢測試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
3-Amino-3-phenyl-1-propanol 14593-04-5 中文名:3-氨基-3-苯基-1-丙醇 分子式:C9H13NO 度:98.0% 小鼠堿性0酸酶 英文名稱: Mouse Alkaline phosphatase 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: ALP
3-Amino-2-naphthoic acid 5959-52-4 中文名:3-氨基-2-萘甲酸 分子式:C11H9NO2 度:98.0% 小鼠同種異體移植炎性因子1 英文名稱: Mouse Allograft Inflamuatory Factor 1 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: AIF-1
3-Amino-2,6-piperidinedione 24666-56-6 中文名: 分子式:C5H9ClN2O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠生成素樣蛋白2 英文名稱: Mouse Angiopoietin like protein 2 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: ANGPTL2
3-Amino-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one 4149/6/8 中文名:3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮 分子式:C9H9N3O 度:98.0% 小鼠生成素樣蛋白4 英文名稱: Mouse Angiopoietin Like Protein 4 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: ANGPTL4
3-Allylrhodanine 1457-47-2 中文名:3-烯丙基羅丹寧 分子式:C6H7NOS2 度:99.0% 關(guān)鍵詞: 小鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人復(fù)合特異性抗原(CPSA)ELISAKit ELISA. 96T/48T 3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid 中文名: 分子式:C17H23NO5
人多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit 2-Deoxy-2,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-1-ulose-3,5-dibenzoate 中文名: 分子式:C19H14F2O6 度:98.0%
人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISAKit ELISA. 96T/48T Timosaponin B-II 中文名:知母皂苷B-II 分子式:C45H76O19
人抵抗素(Resistin)ELISAKIT ELISA. 96T/48T 3,4-Didehydrosapriparaquione 142763-37-9 中文名: 分子式:C20H24O3
人單病毒抗原2(HSV-Ag2)ELISAKit ELISA. 96T/48T 3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol 899822-99-2 中文名: 分子式:C19H31NO5
普通變形桿菌PCR檢測試劑盒價(jià)格SMYD3 Others Human 人 SMYD3 / ZMYND1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸伐昔洛韋/鹽酸萬乃洛韋(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Valacyclovir HCl
人表皮色素細(xì)胞-淺色素總RNAHEM-l NA維庫溴銨質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRVecuronium Bromide
RT4細(xì)胞,細(xì)胞 人胚肺細(xì)胞,MRC-5細(xì)胞 原代平滑肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml維庫溴銨(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Vecuronium Bromide
豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL4GDPNa2;5’-二1酸鳥苷二鈉質(zhì)量規(guī)格:>90%,BRGDP Di Salt
HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) SU11274質(zhì)量規(guī)格:>98%,選擇性的Met抑制劑SU-11274
SGC-7901 人細(xì)胞R-聯(lián)萘酚1酸酯質(zhì)量規(guī)格:>99%(R)-(-)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-diyl hydrogenphosphate
CL-0410P3X63Ag8.653(小鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×22,6-二氯嘌呤質(zhì)量規(guī)格:>97%,原裝進(jìn)口2,6-Dichloropurine
mCF, 小鼠成纖維細(xì)胞2,4-二氯喹唑啉質(zhì)量規(guī)格:>98%2,4-Dichloroquinazoline
人胚腎上皮細(xì)胞系;KiMA 人直腸粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL9-氯甲基蒽質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)口原裝9-(Chloromethyl)anthracene
人纖維細(xì)胞;HT-10801-溴蒽(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)1-Bromoanthracene
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。