產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4319 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
乙型副傷寒沙門氏菌PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Salmonella paratyphi BPCR | BKP4319 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:乙型副傷寒沙門氏菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
5,6,7,7a-Tetrahydrothieno[3,2-c]pyridine-2(4H)-one 中文名: 分子式:C7H10ClNOS 英文名稱: Mouse NO niic oxide 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: NO
5-(4-(2-(5-Ethylpyridin-2-yl)ethoxy)benzylidene)thiazolidine-2,4-dione 中文名: 分子式:C19H18N2O3S 小鼠核轉(zhuǎn)錄因子 英文名稱: Nuclear anscription Factor NF-KB 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: NF-κB
5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde 中文名: 分子式:C26H17ClFN3O3 小鼠核因子-κB亞基ρ65親和肽 英文名稱: Nuclear anscription Factor NF-Κb ρ65 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: NF-Κb ρ65
5-(2-Aminopropyl)-7-cyanoindolin-1-yl)propyl benzoate 中文名: 分子式:C22H25N3O2 小鼠神經(jīng)生長因子 英文名稱: nerve growth factor 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: NGF
5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide 中文名: 分子式:C13H15N3O2 氧化酶(XOD)測試盒(比色法)
蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 4-Amino-N-methylbenzamide 6274-22-2 中文名:4-氨基-N-甲基苯甲酰胺 分子式:C8H10N2O
蘇木素染液 Fast HE tissues and exfoliated cells of dye 4,6-Dichloro-5-nitro-2-propylthiopyrimidine 145783-14-8 中文名: 分子式:C7H7Cl2N3O2S
松弛素-2 英文名稱: Human Relaxin-2 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: RLN-2 4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene 中文名:4,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪 分子式:C28H18N2O2 度:98.0%
四硼酸 5kg 4,5-Dimethoxy-1-cyanobenzocyclobutane 中文名: 分子式:C11H11NO2 度:98.0%
四甲基聯(lián) 5g 4-(Phenylthio)benzyl alcohol 中文名: 分子式:C13H12OS 度:98.0%
乙型副傷寒沙門氏菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)PC-3人細(xì)胞 Human prostate cancer PC-3 cells F-12培養(yǎng)基+10%FBS鹽酸苯海索(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Benzhexol hydrochloride
SCG2 Protein Human 重組人 SCG2 / Secretogranin II 蛋白 (His 標(biāo)簽)葉酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Folic acid
小鼠腹脊髓神經(jīng)細(xì)胞(MN-vsc)(1×106) lovo, 人細(xì)胞 Human葡萄糖酸鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:檢查Calcium gluconate
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-163雙羥萘酸噻嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Pyrantel pamoate
VNN1 Others Mouse 小鼠 VNN1 / Vanin-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢唑啉,唑啉頭孢菌素質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRCefazolin
CHL1 Others Human 人 CHL1 / CALL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 酸性羅丹明B,英文名或英文縮寫:Lissamine rhodamine B,級別:BS,規(guī)格:1克
人周細(xì)胞RNAHBVP miRNA5 μg頭孢坐林內(nèi) Cqfczolin 2923-19-9
PLA2G12B Others Mouse 小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-MINEL-甲(蛋酸)美國藥典級白色至米白色粉末COLDsigma
Kyse510 人細(xì)胞2-環(huán)己基乙磺酸,英文名或英文縮寫:CHES,級別:IND,規(guī)格:100克
CL-0394NCI-H2170(人肺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2Agar,Bacterological 100g 日本分裝
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。