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技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳，以軟件分析電泳條帶的灰度值（IOD值），通過與內(nèi)參基因的灰度值比較，判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：石斑魚虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
 2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無需繁瑣的增菌過程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
6-Fluoro-3-(4-piperidinyl)-1,2-benzisoxazole   84163-13-3  中文名：  分子式：C12H14ClFN2O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

6-Deoxy-3-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone  19131-13-6  中文名：  分子式：C14H24O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠16α羥基雌1(16-αOHE-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

6-Chloroguanine riboside  2004/7/1  中文名：6-氯鳥嘌呤核苷  分子式：C10H12ClN5O4  度：95.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

6-Benzyloxypurine  57500-07-9  中文名：6-芐氧基嘌呤  分子式：C12H10N4O  度：98.0%      小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

6-Benzyloxyindole  15903-94-3  中文名：6-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
兔趨化因子(rabbit Raes)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   分裝     5-Fluorouracil  中文名：  分子式：C4H3FN2O2 

兔素F2aelisa試劑盒   兔素F2a試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔素F2a試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（分裝），產(chǎn)品別名：兔素F2a試劑盒、兔素F2a elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Aminoindazole  19335-11-6  中文名：5-氨基吲唑  分子式：C7H7N3 

兔素E2elisa試劑盒   兔素E2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔素E2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（分裝），產(chǎn)品別名：兔素E2試劑盒、兔素E2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  5-Aminofluorescein  中文名：5-氨基熒光素  分子式：C20H13NO5  度：98.0%

兔素E2(rabbit PGE2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   分裝  5-Formyl-2-furylboronic acid  27329-70-0  中文名：  分子式：C5H5BO4 

兔素E1elisa試劑盒   兔素E1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔素E1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（分裝），產(chǎn)品別名：兔素E1試劑盒、兔素E1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     5-Aminofluorescein  中文名：5-氨基熒光素  分子式：C20H13NO5
石斑魚虹彩病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格NCI-H1299(人非小細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2毛蕊異黃酮(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Calycosin

Promocell C-24300 Melanocyte Growth Medium M2, 色素細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基M2型(即用型) 500ml毛蕊異黃酮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Calycosin-7-O-β-D-glucoside

雪旺細(xì)胞培養(yǎng)基SCM-prf沒食子兒茶素（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品GC;  (-)-gallocatechin

KITLG Others Human 人 SCF / C-kit ligand (aa 1-189 ) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 沒食子兒茶素沒食子酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品GCG;(?)-Gallocatechin gallate

表達(dá)SV40T和EBNA1的人胚腎細(xì)胞;293ET麥冬皂苷D（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Ophiopogonin D
人橫紋肌細(xì)胞;A-204MOPSOwo7iumsalt3-嗎啉-2-羥基磺酸鈉100克質(zhì)譜級(jí)

4. 細(xì)胞系統(tǒng)Boc-L-天冬酸4-環(huán)... Boc-Asp(OcHx)-OH,≥98.0% 73821-95-1 5G 通用試劑

CL-0439SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2錄化亞鐵 Fqrrous chloridq 7728-94-3

人細(xì)胞;Hela P10s-11F 大鼠外膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL牛胰島素，英文名或英文縮寫：Insulin(bovine pancreas)，級(jí)別：精制級(jí)，50u/mg，規(guī)格：250ku

4T1 小鼠癌細(xì)胞姆沙伯W/AW-DMCSCHROMOSORB W/AW-DMCS