產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4394 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
解沒食子酸鏈球菌PCR檢測試劑盒說明書 | Streptococcus gallolyticusPCR | BKP4394 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:解沒食子酸鏈球菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
9-Anthracenecarboxylic acid 中文名:9-蒽甲酸 分子式:C15H10O2 磺酸 SHES 25g
9-Aminominocycline 中文名: 分子式:C23H29ClN4O7 Isicacidsalt 100g
9,9-Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl]fluorene 中文名:9,9-雙[4-(2-羥乙氧基)苯基]芴 分子式:C29H26O4 乙型 英文名稱: Influenza B HA 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: HA
9,9-Bis(4-hydroxyphenyl)fluorene 中文名:9,9-雙(4-羥苯基)芴 分子式:C25H18O2 甲型H3N2HA1 英文名稱: Influenza A H3N2 HA1 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: H3N2 HA1
9,9-Bis(4-amino-3-methylphenyl)fluorene 中文名:9,9-雙(4-氨基-3-甲苯基)芴 分子式:C27H24N2 生長激素 英文名稱: growth hormone 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: HGH
兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 6-Aminouracil 873-83-6 中文名:6-氨基尿嘧啶 分子式:C4H5N3O2 度:98.0%
兔子白介素1β(IL-1β)ELISAKit ELISA. 96T/48T 6-Benzyloxypurine 57500-07-9 中文名:6-芐氧基嘌呤 分子式:C12H10N4O
兔子白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 6-Aminouracil 873-83-6 中文名:6-氨基尿嘧啶 分子式:C4H5N3O2
兔子白介素10(IL-10)ELISAKit ELISA. 96T/48T 6-Benzyloxyindole 中文名:6-芐氧基吲哚 分子式:C15H13NO
兔子白介素1(IL-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 6-Aminoquinoxaline 中文名:6-氨基喹喔啉 分子式:C8H7N3 度:98.0%
解沒食子酸鏈球菌PCR檢測試劑盒說明書MCF-7 [MCF7], 人癌細(xì)胞系阿非迪霉素;艾菲地可寧質(zhì)量規(guī)格:>98%,美國進(jìn)口Aphidicolin from Nigrospora oryzae
96-C細(xì)胞,低轉(zhuǎn)移細(xì)胞 人細(xì)胞,PC-3細(xì)胞 人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞總RNAHBdSF NA京尼平質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRGenipin
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-p7;Vero-HCV-p7桔梗皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Platycodin D
AHSG Others Mouse 小鼠 Fetuin-A / AHSG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 菊苣酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Cichoric Acid
小鼠網(wǎng)織細(xì)胞;M5076金胺O質(zhì)量規(guī)格:BSAuramine O
小鼠色素瘤細(xì)胞;B16D-Val-Leu-LysPNAo2HC1D-纈酰-L-亮酰-L-賴酰1克BR,98%
GP1BB Others Human 人 GP1Bβ / CD42c 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3,3’4,4’-聯(lián)本四羧醋二酐 3,3',4,4'-Biphqnyltqtrcccrboxylic dicnhydridq 40-87-3
人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PG-BE1DL-Lysinemonoxy7nochlorideDL-氫錄賴酸100克BR,99%
CLEC10A Others Mouse 小鼠 CLEC10A / MGL1 / CD301 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二甲基硅油,英文名或英文縮寫:Dimetxylsilicone fluid,級別:GR,85%,規(guī)格:10克
COLO320/DM 人細(xì)胞NiacinassayMedium 100g原裝 BD 232210
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。