產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4534 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
神經(jīng)壞死病病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 | Viral Nervous Necrosis Virus(VNNV)RTPCR | BKP4534 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:神經(jīng)壞死病病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Carvedilol 中文名:卡維地洛 分子式:C24H26N2O4 度:98.0% 金黃地鼠壞死因子α 英文名稱: Golden hamster Tumor Necrosis Factor α 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: TNFα
5-Aminosalicylic acid 中文名:5-氨基水楊酸 分子式:C7H7NO3 度:98.0% 豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Norfloxacin 中文名:諾氟沙星 分子式:C16H18FN3O3 度:98.0% 豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ElisaKit ELISA. 96T/48T
Indapamide 中文名:吲達(dá)帕胺 分子式:C16H16ClN3O3S 度:98.0% 中文名稱 方法 規(guī)格
Loperamide 中文名:鹽酸洛哌丁胺 分子式:C29H34Cl2N2O2 度:98.0% 豚鼠白介素12(IL-12/P70)ELISAKIT ELISA. 96T/48T
小鼠DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Benzoyl-DL-mine 4703-38-2 中文名:苯甲酰基-DL-蛋氨酸 分子式:C12H15NO3S 度:98.0%
小鼠C型尿肽(CNP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Benzoyl-DL-mine 4703-38-2 中文名:苯甲酰基-DL-蛋氨酸 分子式:C12H15NO3S
小鼠C-肽(mouse C-peptide) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 Dioscin 19057-60-4 中文名:薯蕷皂苷 分子式:C45H72O16
小鼠C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Benzoyl leuco methylene blue 中文名:芐?;鶡o(wú)色亞甲基蘭 分子式:C23H23N3OS 度:98.0%
小鼠C肽(C-Peptide)ELISAKit ELISA. 96T/48T Gracillin 19083-00-2 中文名:纖細(xì)薯蕷皂苷 分子式:C45H72O17
神經(jīng)壞死病病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書HEC-1A, 人細(xì)胞系硫化鋅(>98%, Ind Grade)質(zhì)量規(guī)格:>98%, Ind GradeZinc sulfide
CEM細(xì)胞,細(xì)胞 人細(xì)胞,PC-3M細(xì)胞 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞總RNAHIBEpiC NA氧化鋯(>98%,BC)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCZirconium (IV) oxide
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2氯氧化鋯八水(>98%,BC)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCZirconium (IV) oxide chloride octahydrate
AHSG Others Human 人 Fetuin-A / AHSG / FETUA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 氫氧化鋯質(zhì)量規(guī)格:BRZirconium hydroxide hydrate
小鼠周神經(jīng)成纖維細(xì)胞MPNF1酸三戊酯(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)Triamyl Phosphate
人絨毛間充質(zhì)成纖維細(xì)胞 HumanBismuth鉍粉25克TLC
EFNB1 Others Mouse 小鼠 EFNB1 / Ephrin-B1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 頭孢滌泥相關(guān)物質(zhì)A Cqfdinir Rqlctqd CoMpound c;2(R)-2-[(Z)-2-(2-cMinothiczol-4-yl)-2-(xy7noxyiMino)ccqtcMido]-2-[(2RS,5RS)-5-Mqthyl-7-oxo-2,4,5,7-tqtrcxy7no-1H-furo[3,4-d][1,3]thiczin-2-yl]ccqtic ccid 1784-4-9
人肝細(xì)胞cDNAHH cDNATMD-10溴化四乙500毫升AR,99.8%
CD274 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) GENEPAGEPLUS5.5%EZSQZ.*CLDPAK5.5% GENE-PAGE PLUS,擠壓式瓶裝生物技術(shù)級(jí)10X75MLCOLD
大鼠肝細(xì)胞瘤;H-4-II-E(腺苷-5'-二1酸腺苷)
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。