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實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

正常大鼠腎細胞;NRK-52E依替米星（標準品）Etimicin質量規(guī)格：效價測定

CN3 Others Rat 大鼠 Coactin 3 / CN3 細胞裂解液 (陽性對照) 巴龍霉素（標準品）Paromomycin質量規(guī)格：效價測定

成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL拉寧（標準品）Teicoplanin 質量規(guī)格：效價測定

T6細胞，舌癌細胞 甲型副傷寒沙門氏菌 大鼠肝細胞瘤;H-4-II-E制霉菌素（標準品）Nystatin質量規(guī)格：效價測定

CXCL14 Protein Human 重組 CXCL14 / BRAK 蛋白肌苷5'-單1酸Inosine 5'-Monophosphate(IMP)質量規(guī)格：>98%,BR
PC-12(高分化)，PC12，大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞株(高分化)2,4-二乙基硫雜蒽-9-酮(>90.0%(GC))2,4-Diethylthioxanthen-9-one質量規(guī)格：>90.0%(GC)

癌細胞;MDA-MB-231 視網(wǎng)膜色素上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL安乃近(標準品）Analgin質量規(guī)格：含量測定

肺泡上皮細胞cDNAHPAEpiC cDNA艾格列凈;依帕列凈;恩格列嗪Empagliflozin; BI-10773質量規(guī)格：>99%,SGLT-2抑制劑

SELP Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 SELP / selectin P / P-selectin 細胞裂解液 (陽性對照) BQ123BQ-123質量規(guī)格：>95%,BR

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D3泛影酸（標準品）diatrizoic acid質量規(guī)格：鑒別
正常肺上皮細胞;BEAS-2B鹽酸黃連堿（標準品）Coptisine chloride質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CD200R1L Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200RLa 細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸石蒜堿(標準品)Lycorine chloride質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

原代成纖維細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml鹽酸甜菜堿（標準品）Betaine 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CD38 Others Rabbit 兔 SCARB3 細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸小檗胺（標準品）Berbamine 質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

APP基因轉染CHO細胞株;7WD10鹽酸益母草堿(標準品)Leonurine 質量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品
色素瘤細胞;A875蓖麻油酸甲酯（標準品）Methyl ricinoleate質量規(guī)格：分析標準品,≥99%(GC)

IL18RAP Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18RAP 細胞裂解液 (陽性對照) 山崳酸甲酯（標準品）Methyl behenate質量規(guī)格：分析標準品

肝竇內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL二十四烷酸甲酯（標準品）Methyl tetracosanoate質量規(guī)格：分析標準品

LLC細胞，小鼠細胞 CHO(中國倉鼠卵巢細胞) 恒河猴肺細胞;RM-L1芥酸甲酯（標準品） Methyl cis-13-docosenoate質量規(guī)格：>90.0%(GC)

PPBP Protein Rat 重組大鼠 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 標簽)十九酸（標準品）Nonadecanoic Acid質諾如病毒G2型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒量規(guī)格：分析標準品,≥99.5% (GC)

本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。