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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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病毒通用型染料法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 貨號:BK-P64701
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2021-01-10
  • 更新日期: 2024-11-22
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進(jìn)口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BK-P64701
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50次
純度 %
CAS編號
是否進(jìn)口

本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

病毒通用型染料法熒光定量PCR試劑盒

50

BK-P64701

實驗方法步驟:
方法
1
:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix
2mM 
4 μl     
引物110pM 
2 μl     
引物210pM 
2 μl     Taq
酶 (2U/μl 
1 μl     DNA
模板(50ng-1μg/μl 
1 μl     
ddH2O 50 μl 

PCR實驗步驟:
取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
兩相分離 每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,1530℃孵育23分鐘。4℃12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA
沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530℃孵育10分鐘后,于4℃12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA
清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA
干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法:
一、樣品采集:
1
、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2
、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3
、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4
、病灶部位樣品:取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 10 倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2.
標(biāo)記 6 個離心管,分別為 76,54,32。
3.
用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6.
換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

CL-0032BEL-7404(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×23-metxoxypxenol3-羥基1CP,99%

ACVR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 ACVR2B / ACIIB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三錄本 Bqnzotrichloridq1998-7-7

無血清細(xì)胞凍存液SF-CFMESBO環(huán)氧豆油100AR90%

SNU-182細(xì)胞,人細(xì)胞 穩(wěn)定表達(dá)EBNA1的人胚腎細(xì)胞,293E細(xì)胞 外周血白細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)二水合鉬酸鈉,英文名或英文縮寫:wo7ium molybdate dihydrate,級別:AR,99.5%,規(guī)格:100

綿羊肺細(xì)胞;OAR-L1Middlebrook7H10Agar 500g原裝 BD 262710
犬腎細(xì)胞系/野生型;MDCK/wildL-半胱胺酸鹽酸鹽無水物L-Cysteine ,anhydrous質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

SEMA5A Others Mouse 小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽L-Lysine methyl ester di質(zhì)量規(guī)格:0.98

成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLL-蛋氨酸甲酯鹽酸鹽L-Mine Methyl Ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%

C918細(xì)胞,眼脈絡(luò)色素瘤細(xì)胞 糞腸球菌(高耐) 正常小鼠Sertoli細(xì)胞;TM4膽硫酸酯鈉鹽 cholesteryl sulfate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

CCL16 Protein Human 重組 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 標(biāo)簽)O-叔丁基-L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽O-tert-Butyl-L-serine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:0.98
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3三亞苯(>96.0%(GC))Triphenylene質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(GC)

CXCL16 Others Canine 狗 CXCL16 / SR-PSOX 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 內(nèi)消旋-四苯基卟吩(>92.0%(HPLC))meso-Tetraphenylchlorin質(zhì)量規(guī)格:>92.0%(HPLC)

Caco-2,結(jié)直腸腺癌細(xì)胞四苯基卟吩(不含氯)(>98.0%(HPLC))Tetraphenylporphyrin (Chlorin free)質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)

NEI-H209細(xì)胞,小細(xì)胞細(xì)胞 細(xì)胞,22RV1細(xì)胞 脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞RNAHCPF miRNA5 μg2,4,6-三苯基-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC))2,4,6-Triphenyl-1,3,5-triazine質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B1,3-二苯基-1,3-丙二酮(>98.0%(GC))1,3-Diphenyl-1,3-propanedione質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
MKN-45細(xì)胞,人低分化細(xì)胞 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,BE(2)C細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2氘代DMSO-D6(10 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%

CRFK(貓腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2氘代DMSO-D6(50 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.8%+TMS 0.03%

CA10 Others Human 人 CA10 / CARPX 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 氘代DMSO-D6(50 g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%

人類成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5538SKIN氘代DMSO-D6(100g )Dimethyl Sulfoxide-D6質(zhì)量規(guī)格:D,99.8%

NRN1 Others Human 人 NRN1 / Neuritin 1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乙酸銨(色譜級)Ammonium acetate質(zhì)量規(guī)格:for HPLC,99.0%

實驗注意事項:
1
RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2
)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3
)客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
4
)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCRquantitative real-time PCRqPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNARNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
病毒通用型染料法熒光定量PCR試劑盒主要服務(wù):DNARNA*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR

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