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| 產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P64680 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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霍山石斛PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64680 |
實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
8910PM細胞，人細胞 小鼠細胞,EMT6細胞 腎小管上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)十六烷500毫克2～8℃
Dami(人巨核細胞細胞) 5×106cells/瓶×2十八烷基基化銨 Trimethyloctadecylammonium chloride,≥... 112-03-8 1G 通用試劑
HTEpC Pellet 人類氣管上皮細胞團塊 > 1 mio.cells 人骨骼肌細胞cDNAHSkMC cDNA異麥芽三糖 ISOMcLTOTRIOSq 3371-20-4
CL-0066COLO 205(人細胞)5×106cells/瓶×2potewwiumcaonaTEANxy7noUS碳酸鉀,無水ACS級白色顆粒粉末RTsigma
FCGR2B Others Human 人 CD32b / FCGR2B CHO細胞裂解液 (陽性對照) 101-80-44，4-二基二本4,4'-Oxydianiline
大鼠*基質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基 100mL丙硫異煙胺質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRProthionamide
BV-2小鼠小膠質(zhì)細胞 Microglial cells of BV-2 mice 1640+20%FBS丙硫異煙胺(標準品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品Prothionamide
EREG Protein Human 重組 Epiregulin / EREG 蛋白 (Fc 標簽)硬脂酸甲酯(>99.5%(GC),標準物質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：>99.5%(GC),標準物質(zhì)Methyl Stearate
VE(內(nèi)皮細胞) 5×106cells/瓶×2 胰島β細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)亞麻酸甲酯(>98.0%(GC),標準物質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC),標準物質(zhì)Methyl Linolenate
大鼠嗜堿性粒細胞性細胞;RBL-2H3亞油酸甲酯(>99.0%(GC)，標準物質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)，標準物質(zhì)Methyl Linoleate
小鼠單核巨噬細胞;J774A.1氯化鍶六水Strontium
chloride, hexhydrate質(zhì)量規(guī)格：AR,≥99%
tTA基因修飾的小鼠(B類);F9-CAG-tTA-1A3 IV型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL硫酸鈣二水Calcium sulfate, dihydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR
AGS胃腺癌細胞 Human2'-脫氧胞苷'-5'-1酸(dCMP)dCMP, 2'-Deoxycytidine 5'-monophosphate, free acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學級
TNFRSF1B Others Mouse 小鼠 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 細胞裂解液 (陽性對照) DSS(分子生物學級)DSS質(zhì)量規(guī)格：分子生物學級
*成纖維細胞-心房HCF-aa腺苷脫氨酶(15U/mg)Adenosine deaminase from calf spleen 15U/mg質(zhì)量規(guī)格：15U/mg,進口
人脈絡叢成纖維細胞總RNAHCPF NA丁二酸二甲酯(>99%,BR)Dimethyl
succinate質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
CD83 Others Mouse 小鼠 CD83 / HB15 人細胞裂解液 (陽性對照) 二甲基甲酮鈉鹽(>97%,BR)Dimethylglyoxime salt質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR
U87MG 人惡性膠質(zhì)母細胞瘤細胞直接藍71(≥50%,BR)Direct blue 71質(zhì)量規(guī)格：≥50%,BR
CL-0307SW1116(人腺癌細胞)5×106cells/瓶×2天狼猩紅Direct red 80質(zhì)量規(guī)格：BS
RSC, 大鼠雪旺細胞DL-苯甘氨酸(>98%，BC)DL-alpha-Phenylglycine質(zhì)量規(guī)格：>98%，BC
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative
real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
霍山石斛PCR試劑盒主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
