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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

洋蔥曲霉   伊氏李斯特氏菌
洋蔥伯克霍爾德氏菌   巴氏醋桿菌巴氏亞種
產(chǎn)氣腸桿菌AS1.489凍干粉南京便診   棉花立枯菌
臺(tái)灣根霉   茯苓 Poria cocos
褐球固氮菌   疣孢脆柄菇 Psathyrella velutina
血瓊脂平板(BAP)[血平板]70mm   赤褶菇 Rhodophyllus sp
洋蔥曲霉   尿素八疊球菌
繩狀青霉   異型酒香酵母
裂皮側(cè)耳   假芝
類球紅細(xì)菌(球形紅桿菌)   阿拉伯糖醇漢遜酵母
沙保羅葡萄糖瓊脂表面培養(yǎng)基60mm/25cm2   紫色鏈霉菌
氧化微桿菌  
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl     dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl     Taq酶 （2U/μl）
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

轉(zhuǎn)化細(xì)胞 卵巢成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100mg/ml)Butachlor solution質(zhì)量規(guī)格：0.100mg/ml

脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞RNAHCPF miRNA5 μg丁草胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Butachlor質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,95%

KYNU Others Human  KYNU / Kynureninase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)Butachlor solution質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4%

犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)丁草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=7%)Butachlor solution質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=7%

U-2 OS細(xì)胞，細(xì)胞 二倍體細(xì)胞系,KMB-17細(xì)胞 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3炔草隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Buturon質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
恒河猴胚腎細(xì)胞;FRhK-4 [FRhK4]1氫-1-乙基坎地沙坦酯1H-1-Ethyl Candesartan Cilexetil質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CD160 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD160 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) O-去乙基坎地沙坦酯O-Desethyl Candesartan Cilexetil質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CL-0221SVEC4-10(小鼠結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×22-乙基蒽醌(>98.0%(GC))2-Ethylanthraquinone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

J-111細(xì)胞，單核細(xì)胞細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞,CGM1細(xì)胞 細(xì)胞;Hela 229 [HeLa229]1-羥環(huán)己基苯酮(>98.0%(GC))1-Hydroxycyclohexyl Phenyl Ketone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

A-431(表皮癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2二苯基鎓六氟1酸鹽(>97.0%(T))Diphenyliodonium Hexafluorophosphate質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)
神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)1酸鈉Hydrocortisone  phosphate質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

VIP Others Human  Vasoactive iestinal peptide / VIP 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 21-辛酸酯Hydrocortisone 21-caprylate質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

小鼠Lewis瘤株;LLT21-半琥珀酸鈉鹽Hydrocortisone 21-hemisuccinate  salt質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CCC-HPF-1細(xì)胞，胚 小鼠腎系膜細(xì)胞,MC53細(xì)胞 CL-0098HCT-8(盲腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×23-(O-羧甲基)1Hydrocortisone 3-(O-carboxymethyl)oxime質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

T-47D(管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×221-半琥珀酸酯Hydrocortisone 21-hemisuccinate質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
貂源細(xì)胞 細(xì)胞細(xì)胞，A3細(xì)胞 3T3-swiss albino細(xì)胞，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞CPA-mN偶氮錄膦mN1克IND

胚腎細(xì)胞;293 Cells, low passage肖醋鈰(Ⅳ)銨 Cqric cmmonium nitnctq 16774-1-3

HA Others H1N1 甲型 H1N1 (A/New Caledonia/20/1999) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 1,4-二(4-甲基-5本基-2-咪唑)本shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光1克

CL-0136L6(大鼠成肌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2(R)-(-)-1,2-Propanediol1,2-25克AR，99%

GPT Others Rat 大鼠 GPT1 / GPT 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) ACES 10g/25g/100g Amresco 0285

曲霉屬通用PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。