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BJ5183-AD-1 電擊感受態(tài)細(xì)胞

起訂量 (瓶)價(jià)格

1-10￥2350 /瓶

≥10￥1250 /瓶

品牌：帛科

產(chǎn)地：進(jìn)口、國產(chǎn)

貨號：BK-G63246

發(fā)布日期： 2021-02-21
更新日期： 2024-10-21

發(fā)送咨詢信息

產(chǎn)品詳請

產(chǎn)地	進(jìn)口、國產(chǎn)
保存條件	低溫冷藏
品牌	帛科
貨號	BK-G63246
用途	產(chǎn)品僅用于科研
組織來源	詳見說明書
細(xì)胞形態(tài)	詳見說明書
是否是腫瘤細(xì)胞	否
CAS編號
保質(zhì)期	詳見說明書
器官來源	詳見說明書
免疫類型	詳見說明書
品系	詳見說明書
生長狀態(tài)	詳見說明書
物種來源	詳見說明書
包裝規(guī)格	50ul5 50ul50
純度	%
是否進(jìn)口	是

規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：BJ5183-AD-1 電擊感受態(tài)細(xì)胞
規(guī)格：50ul*5 50ul*50
分類：克隆感受態(tài)細(xì)胞
用途：生化試劑（用于科研試驗(yàn)研究）
儲存條件: -70℃保存，必須加干冰運(yùn)輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個(gè)月。
外觀:（性狀）干冰運(yùn)輸，單加10kg干冰費(fèi)
單位: 袋

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：

1. 感受態(tài)細(xì)胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細(xì)胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽性對照）能長出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個(gè)菌都沒長出來，重復(fù)了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細(xì)胞的制作不過關(guān)，還是連接出了問題？哪個(gè)可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時(shí)轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個(gè)陰性對照，確定酶切是否完全。同時(shí)連接前請確定質(zhì)粒和片段濃度達(dá)到最小連接量的要求。
感受態(tài)細(xì)胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲存過程中沒有發(fā)生凍融的情況，是可以用來轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時(shí)間過長，轉(zhuǎn)化效率會有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細(xì)胞。
操作方法：
1. DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

轉(zhuǎn)染試劑（溶液）質(zhì)量規(guī)格：>95%，分子生物學(xué)級Transfection Reagents-Biofection 大鼠細(xì)胞因子ELISA檢測試劑盒RatlymphocytefactorELISAKit 96T/48T 石蠟切片結(jié)締組織(CONNECTIVETISSUE)馬森(MASSON)染色試劑盒50

反式肉桂醛(>95%，BR)質(zhì)量規(guī)格：>95%，BRtrans-Cinnamaldehyde 人c-sis 試劑盒 Human c-sis ELISA Kit ELISAKitTn-Ⅰ人肌鈣蛋白Ⅰ規(guī)格：48T/96T

富勒烯 C60()，球 C60質(zhì)量規(guī)格：>99.5%(HPLC)Fullerene C60 (pure) 英文名稱MouseU-TSHELISAKit小鼠高靈敏度激素(U-TSH)規(guī)格：96T/48T 大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒組裝/原裝

焦1酸(>45%，BR)質(zhì)量規(guī)格：>45%，BRPyrophosphoric acid 冰凍切片組織化學(xué)AP酶聯(lián)NBT/BCIP間接檢測試劑盒(含AP二抗)20 人胃泌素(Gasin)試劑盒 Human Gasin ELISA Kit

犬胰蛋白酶(ypsin)試劑盒 Canine ypsin ELISA Kit 18607-90-4卡枯醇說明書 kakoul

英文名稱MouseSerotonin5-HydroxyyptamineELISAKit小鼠5-羥色氨(5-HT)規(guī)格：96T/48T 58-55-9茶堿品牌 Theophylline

差異相減雜交試劑盒10 34271-54-0茶氨酸規(guī)格 Theanine

Ratfreefattyacids,FFAELISA試劑盒大鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 30462-34-1茶黃素-3-沒食子酸酯 Theaflavin-3-Gallate(TF-3-G)

小鼠組蛋白去乙?；?/span>4(HDAC4)ELISA試劑盒，英文名： HDAC4 ELISA Kit 28543-07-9茶黃素-3＆#146;-沒食子酸酯說明書 Theaflavin-3＆#146;-Gallate (TF-3＆#146;-G)

83-86-3植酸品牌 Phytic acid 組織HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒20

83-67-0可可堿品牌 Theobromine 組織FGFR1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

83-49-8豬去氧膽酸 Hyodeoxycholic acid 組織EPHA3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20

83-48-7豆甾醇品牌 Stigmasterol 組織EBV(EPSTEIN-BARR)病毒定性檢測試劑盒20

BJ5183-AD-1 電擊感受態(tài)細(xì)胞83-46-5β-谷甾醇說明書 β-Sitosterol 組織D-乳酸比色法定量檢測試劑盒20

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