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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無(wú)菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

中文名稱(chēng)   方法   規(guī)格              Clopidogrel bisulfate  中文名：硫酸氫氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2 

中文名稱(chēng)   方法   規(guī)格              5-O-Ethylcleroindicin D  中文名：  分子式：C10H16O4 

致病性大腸桿菌(EPEC)*試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>)   48T  Topiramate  中文名：托吡酯  分子式：C12H21NO8S  度：98.0%

質(zhì)粒中量提取試劑盒   Plasmid Exaction Kit  Torososide A  165689-32-7  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

質(zhì)粒中量提取試劑盒   50T  trans-4-Aminocyclohexanol  27489-62-9  中文名：  分子式：C6H13NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;KM933鹽酸育亨賓質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRYohimbine HCl

CD3E Others Human  CD3e / CD3 epsilon 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸育亨賓（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Yohimbine HCl

臍帶間質(zhì)干細(xì)胞 Human umbilical cord mesenchymal stem cells硼標(biāo)準(zhǔn)溶液（100μg/mL,基體：水）質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL,基體：水Boron solution

Saos-2細(xì)胞，成細(xì)胞 鮮綠青霉 二倍體細(xì)胞;HEL鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L HNO3）質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L HNO3Bismuth solution

T/G HA-VSMC(平滑肌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000mg/l,溶劑：1%硫酸）質(zhì)量規(guī)格：1000mg/l,溶劑：1%硫酸Copper solution
內(nèi)根殼細(xì)胞總RNAHHIRSC NA二乙基錫(標(biāo)準(zhǔn)品)Diethyltin-dichloride質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,10ng/μl溶于

VEGFA Others Rat 大鼠 VEGF164 / VEGFA 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 草萘胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Napropamid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr-除蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=3%)Diflubenzuron solution質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=3%

NCI-H460[H460]細(xì)胞，大細(xì)胞細(xì)胞 ,H4細(xì)胞 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32二噻農(nóng)(標(biāo)準(zhǔn)品)Dithianon質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過(guò)表達(dá));LA1-VAP33-GFP棉隆(標(biāo)準(zhǔn)品)Dazomet質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%
Echinoynethiophene A  中文名：  分子式：C13H10O2S    豬C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Ecdysterone 20,22-monoacetonide  中文名：  分子式：C30H48O7    豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Dyphylline  中文名：二羥丙茶堿  分子式：C10H14N4O4    豬熱休克蛋白40elisa試劑盒   豬熱休克蛋白40試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬熱休克蛋白40試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬熱休克蛋白40試劑盒、豬熱休克蛋白40eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Duloxetine   中文名：鹽酸度洛西汀  分子式：C18H20ClNOS    豬熱休克蛋白20elisa試劑盒   豬熱休克蛋白20試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬熱休克蛋白20試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬熱休克蛋白20試劑盒、豬熱休克蛋白20eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

裸蓋魚(yú)源性成分探針?lè)晒舛縋CR試劑盒D-Tryptophan methyl ester   中文名：  分子式：C12H15ClN2O2    豬去甲上腺素elisa試劑盒   豬去甲上腺素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬去甲上腺素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬去甲上腺素試劑盒、豬去甲上腺素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。